KIAA1462基因启动子区功能突变鉴定及其与扬州鹅产蛋性能相关性研究

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扬州鹅是江苏地区饲养的主要鹅种,其生长速度快,抗病能力强,备受养殖业青睐。产蛋量是衡量鹅生产能力的一个重要指标,提高鹅产蛋性能是促进鹅养殖业取得良好经济效益的重要途径。鹅产蛋性状遗传力水平中等偏下,开发有效的分子遗传标记是提升鹅产蛋性能选育效果的有效手段。SNP Record-134172(rs1714766362)是我们前期通过简化基因组测序筛选出的一个与鹅产蛋性能相关的突变位点,位于鹅KIAA1462基因第二个内含子区域。尽管前期实验已证实其与产蛋性能相关,但是其作用机制并不清楚。本研究首先采用比较基因组克隆获得扬州鹅KIAA1462基因编码区全长4029 bp。通过荧光定量PCR发现KIAA1462基因在11种检测的扬州鹅组织器官中均有表达,其中在肝脏和卵巢中表达量较高,并且在F1等级卵泡中表达量较其他卵泡高(P<0.05)。对SNP Record-134172位点不同基因型产蛋性能比较发现(n=256),AA基因型产蛋性能优于TA和TT基因型(P<0.05);对不同基因型间表达水平比较表明(n=16),AA基因型卵巢组织中KIAA1462基因mRNA表达量显著高于TA基因型(P<05)。在扬州鹅卵泡颗粒细胞中过表达KIAA1462基因,凋亡标记基因Caspase-3表达量显著降低(P<0.05),而干扰卵泡颗粒细胞中KIAA1462表达则引起Caspase-3表达量显著升高(P<0.05),推测KIAA1462基因在调控卵泡颗粒细胞增殖与凋亡中发挥着重要作用。由于SNP Record-134172位于内含子区域,我们推测在KIAA1462基因启动子区域存在着与它连锁的功能突变位点。用AA和TT基因型鹅DNA样对KIAA1462基因启动子区域扩增后测序比对,在KIAA1462 ATG上游413 bp处发现了一个与位点Record-134172完全连锁的SNP位点c.-413 C>G(db SNP ss2137504176)。EMSA和双荧光素酶报告载体实验均证实,当等位基因C存在时,KIAA1462基因启动子区能与转录因子GR结合,而当C突变为G,则启动子区不能与GR结合。通过本研究,我们在KIAA1462基因启动子区域发现了一个新的变异位点,它能调控GR的转录活性并且与扬州鹅产蛋性能密切相关,可作为分子标记应用到实际育种工作当中。
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