鼠抗人ICOS单克隆抗体的研制及GL50-ICOS信号对T细胞共刺激作用的研究

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ICOS(Inducible Costimulator)及其配体GL50是新近发现的CD28/B7家族的一对新成员。ICOS主要表达在活化的T细胞上,GL50可持续表达在B淋巴细胞、巨噬细胞表面或诱导表达于成纤维细胞表面。GL50-ICOS的相互作用,对机体再次免疫应答过程中T细胞的增殖、活化、分化、细胞因子的分泌以及B细胞的增殖、分化、抗体分泌等都发挥了重要的作用。目前的研究业已证明:GL50-ICOS信号途径在机体炎症、自身免疫性疾病、肿瘤和移植排斥等免疫应答过程中发挥着重要的调节作用。对该信号途径的有效调节将不仅为理解人体复杂、精细的免疫应答系提供新的视角,而且还具有潜在的临床应用前景。因此特异性鼠抗人ICOS单克隆抗体的研制在为研究GL50-ICOS信号途径生物学效应提供有力的研究工具的同时,也具有潜在的临床应用价值。 一 分泌鼠抗人ICOS单抗的杂交瘤细胞株的制备及其生物学特性的鉴定 以肺癌病人胸水中高表达ICOS的活化T细胞为免疫原,免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞融合技术,将反复免疫后的小鼠的脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合,以ICOS-L929转基因细胞作为阳性筛选细胞,以转空载体的对照细胞mock-L929作为阴性对照细胞,经免疫荧光标记分析及抗体分泌阳性孔内杂交瘤细胞的反复筛选,并经多次克隆化培养,最终获得1株持续、稳定分泌鼠抗人ICOS单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为3F8。经快速定性试纸法分析鉴定,3F8的重链为IgG1;而轻链为κ。经体外连续传代(40代)培养,液氮冻存半年后复苏,仍生长良好,稳定分泌抗体。继而采用本室建立的腹水诱生和纯化方案,腹水形成阳性
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