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稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)引起的稻瘟病是水稻上最为严重的毁灭性真菌病害之一,每年给水稻生产带来重大的经济损失。稻瘟菌作为一种典型模式病原真菌,对其生物学及分子生物学进行广泛深入的研究,不仅能为稻瘟病防治提供理论基础,而且可为其他病原真菌的研究提供借鉴作用。通过生物信息学分析方法,对本实验室前期筛选的在稻瘟菌侵染阶段特异表达的851个候选分泌蛋白的亚细胞定位位置进行了预测,发现定位于叶绿体和内质网(或过氧化物酶体)上的候选分泌蛋白分别有31和5个,其中大多数预测编码假设蛋白。通过PCR方法,成功克隆了36个候选分泌蛋白中的20个,并分别将其与绿色和/或红色和/或黄色报告基因间融合构建瞬时表达载体。表达分析结果显示,克隆的20个基因多数在附着胞中强表达或特异表达。在烟草和水稻原生质体瞬时表达系统中,有5个基因没有任何定位信号,其余15个则至少在一个表达系统中有明确定位结果,但多数定位于细胞核和/或细胞膜,与生物信息学预测结果间不尽一致;仅有1个基因MGG 05381和2个基因MGG08275和MGG03946分别定位于叶绿体和过氧化物酶体中。将融合表达载体注射至烟草叶片中,没有发现能诱导细胞死亡的候选分泌蛋白,但检测到5个基因(MGG00120、MGG05381、MGG08275、MGG08994和MGG 03946)可抑制由BAX诱导的细胞死亡。通过酵母系统验证随机筛选的8个候选分泌蛋白的分泌功能,证实其中5个具有分泌功能、2个仍待验证、1个不具有分泌功能,表明通过生物信息学方法预测蛋白分泌性的可靠性较高。综合以上不同结果,认为MGG00120、MGG08275和MGG03946这3个基因最可能是稻瘟菌的候选效应子,其分别定位于细胞膜和过氧化物酶体中,在附着胞中强表达,具有抑制BAX诱导的细胞死亡的功能。针对这3个候选效应子的稻瘟菌敲除相关载体已经构建完成,并已获得MGG 03946基因敲除的稻瘟菌株。本研究结果将为进一步鉴定稻瘟菌效应子及其功能,解析“稻瘟菌—水稻”互作分子机制提供重要帮助,具有十分重要的意义。