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目的：已有的研究表明，胰岛β细胞功能受多种因素的调控，以适应不同生理及病理状况下的需求。先后发现许多因素对胰岛β细胞的功能具有调节作用，如营养物质、激素和生长因子等。近年来的研究提示脾也是影响胰岛β细胞功能的一个重要因素。有临床资料分析指出，糖尿病在部分胰腺及脾切除患者比单纯部分胰腺切除患者具有更高的发生率。在不同糖尿病小鼠模型的胰岛移植的研究中，表明外源性脾细胞灌注有助于糖尿病小鼠胰岛β细胞群扩大。本研究从细胞水平观察脾细胞对胰岛的增殖和胰岛素分泌功能的影响；并通过分析胰十二指肠同源盒基因-1（pancreatic and duodenal homeobox-1，PDX-1）的表达差异，从分子水平探讨脾细胞对胰岛β细胞的功能影响。
方法：采用Dextran密度梯度离心法分离纯化SD大鼠胰岛，同时分离脾细胞。实验分为对照组（单纯胰岛培养组）、共培养组（胰岛与脾细胞共培养组），分别在Transwell小室系统培养。在培养的第1、3、5、7天收集胰岛，用Cell Counting Kit-8（CCK-8）试剂盒通过酶标仪测定吸光度值，了解脾细胞对胰岛增值的影响；用间接放射免疫法测定葡萄糖刺激胰岛素的分泌量并计算胰岛素刺激指数（SI），了解脾细胞对胰岛素分泌的影响；用Trizol提取胰岛总RNA，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分别扩增PDX-1和β-actin的mRNA，将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，在UV透射反射分析仪下观察扩增条带，在凝胶成像系统中成像并分析扩增条带的灰度。PDX-1mRNA的表达水平以PDX-1与β-actin的灰度比值表示。从而从分子水平探讨脾细胞对胰岛功能的影响。
结果：
1、胰岛的分离和纯化
大鼠胰腺经胶原酶Ⅴ消化和Destran T40纯化液纯化后，平均每只大鼠可获得胰岛572±78个，纯度高达92％以上。AO/PI染色后，可见绝大部分胰岛呈现绿色荧光，活胰岛比率大于90％。
2、体外脾细胞对胰岛增值的影响
在培养的第1、3、5、7天，脾细胞和胰岛共培养组中的吸光度值分别是0.214±0.025、0.863±0.045、0.739±0.034和0.654±0.051；单纯胰岛培养组的吸光度值分别是0.201±0.028、0.423±0.037、0.410±0.031和0.297±0.043。在共培养组第1天的吸光度值与对照组相比，差异不明显，无统计学意义（P>0.05）。在共培养组的第3、5、7天的吸光度值分别与对照组相比，具有显著差异（P<0.01）。
3、体外脾细胞对胰岛素分泌的影响
在葡萄糖刺激胰岛素分泌的实验中，在高糖刺激下，共培养组在培养的第1、3、5、7天的胰岛素分泌量（μIU/ml）分别为5.293±0.221、10.925±0.328、8.935±0.415和8.523±0.564；对照组的相应胰岛素分泌量为5.201±0.218、5.932±0.284、5.378±0.218和5.183±0.237。在培养的第1天，对照组和共培养组的胰岛素分泌量无统计学差异（P>0.05）；但在培养的第3、5、7天，共培养组的胰岛素分泌量与对照组的相比，具有显著差异（P<0.01），尤其是在培养的第3天。
在培养的第1、3、5、7天，脾细胞和胰岛共培养组中的胰岛素的刺激指数（SI）分别为2.223±0.172、3.418±0.211、3.029±0.308和2.952±0.284；对照组SI分别是2.196±0.164、2.361±0.194、2.084±0.225和1.976±0.209。在培养的第1天，对照组和共培养组的SI相比，无统计学差异（P>0.05）；但在培养的第3、5、7天，共培养组的SI与对照组的SI相比，具有显著差异（P<0.01），尤其是在培养的第3天。
4、体外脾细胞对胰岛的PDX-1基因的表达
RT-PCR分别扩增PDX-1和β-actin mRNA，扩增产物通过琼脂糖凝胶电泳得到两个片段，分别为PDX-1（202bp）和β-actin（359bp）。成像结果分析显示，在培养的第1、3、5、7天，共培养组的PDX-1和β-actin的灰度比值分别为0.210±0.048，0.711±0.062、0.552±0.058和0.415±0.039；对照组的PDX-1和β-actin的灰度比值分别为0.181±0.057、0.453±0.077、0.261±0.048和0.254±0.027。在培养的第3、5、7天，共培养组的PDX-1和β-actin的灰度比值与对照组相比，具有统计学差异（P<0.01）。但在培养的第1天，对照组和共培养组的PDX-1和β-actin灰度的比值相比，无统计学差异（P>0.05）。
结论：
在脾细胞与胰岛共同培养的体系中，脾细胞可以促进胰岛的增值和胰岛素的分泌，并能从分子水平使胰岛PDX-1基因表达增强。