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第一部分:心肌细胞焦亡模型的建立目的:通过心肌缺血-再灌注及心肌细胞缺氧-复氧建立焦亡模型,评估建模效果并检测相关miRNA表达的改变。方法:选用6-8周龄SPF级Balb/c小鼠及大鼠H9c2心肌细胞系,分别通过缺血-再灌注及缺氧-复氧方法处理后,检测血清及培养液上清中IL-1β、IL-18浓度和心肌细胞IL-1β、IL-18转录水平,以及心肌细胞CRISPLD2和焦亡相关蛋白casp.-1、casp.-11表达水平。结果:(1)缺血-再灌注(I/R)组小鼠血清中以及缺氧-复氧(H/R)组H9c2细胞培养液上清中IL-1β、IL-18浓度分别较假手术(sham)组和对照(Ctrl)组明显升高。在转录水平上,也检测到I/R组及H/R组心肌细胞中IL1β、IL-18呈高水平表达。(2)与sham组相比,I/R组小鼠心肌细胞中焦亡相关蛋白casp.-1、casp.-11水平明显升高。在离体细胞实验中也有相同结果。(3)发生焦亡的心肌细胞中CRSIPLD2表达水平明显下降,miRNA-424表达水平明显提高。结论:缺血-再灌注及缺氧-复氧均可以诱导心肌细胞焦亡。发生焦亡的心肌细胞中CRISPLD2及miRNA-424表达均有显著改变。第二部分:mi RNA-424通过调节CRISPLD2表达影响心肌细胞焦亡目的:通过体内及体外实验探索mi RNA-424-CRISPLD2通路对心肌细胞焦亡的影响。方法:通过缺血-再灌注(I/R)及缺氧-复氧(H/R)分别在体内和离体细胞实验中诱导心肌细胞焦亡。分别过表达mi RNA-424、低表达mi RNA-424,在蛋白和转录水平检测IL-1β、IL-18的表达,并检测心肌细胞中CRISPLD2和焦亡相关蛋白casp.-1、casp.-2表达水平。结果:(1)CRISPLD2基因的3’非翻译区(3’-UTR)中存在mi RNA-424保守结合序列。与对照组相比,mi RNA-424抑制剂处理后在可以观察到CRIPSLD2表达升高;转染mi RNA-424可以明显抑制CRISPLD2表达。(2)与对照组相比,加入mi RNA-424 mimic下调CRISPLD2表达后,IL-1β、IL-18及焦亡相关蛋白casp.-1、casp.-11表达水平明显降低;mi RNA-424抑制剂上调CRISPLD2表达后,IL-1β、IL-18及casp.-1、casp.-11表达水平明显升高。结论:mi RNA-424可以与CRISPDL2基因的3’-UTR特异性位点结合,使CRISPLD2表达水平下降,从而促进心肌细胞炎症反应及心肌细胞焦亡。