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本研究通过对不转移人肝癌细胞系(Hep3B)与具有低、高转移潜能的人肝癌细胞系(MHCC97L/MHCC97H)的酪氨酸磷酸化蛋白质表达谱差异分析，找到与HCC转移复发相关的关键酪氨酸磷酸化蛋白质分子。利用三种不同方法从不同角度筛出一些差异蛋白质，并对其中的膜联蛋白I进行了再验证。
第一部分人肝癌细胞系中转移相关酪氨酸磷酸化蛋白质的差异分析。优化双向凝胶电泳，蛋白印迹及酪氨酸磷酸化蛋白质富集相关技术，建立相对稳定、适合本实验室的技术平台，联合质谱技术，筛查在肝癌转移过程中发挥重要作用的差异酪氨酸磷酸化蛋白质分子。采用三种不同的方法，从不同角度和层面对三种具有不同转移潜能的人肝癌细胞系中酪氨酸磷酸化蛋白质表达谱进行检测分析：(1)用2-DE+蛋白印迹+MALDI-TOF-MS/MS。(2)用免疫沉淀(差异条带)+MALDI-TOF-MS/MS。(3)用免疫沉淀(全酪氨酸磷酸化蛋白质)+LC-ESI-MS/MS。
第二部分转移潜能不同人肝癌细胞系中差异酪氨酸磷酸化蛋白质的再验证。为保证差异酪氨酸磷酸化蛋白质筛选结果的可信度及下游分析的确定性，我们选取差异蛋白质中的膜联蛋白Ⅰ进行了再验证，应用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、蛋白印迹和细胞免疫化学技术证实膜联蛋白Ⅰ的确在有转移潜能人肝癌细胞系中高表达。结论：1.通过对2-DE、酪氨酸磷酸化蛋白质富集技术的摸索和优化，联合质谱技术建立了适合筛查磷酸化蛋白质的技术平台。2.建立了不转移人肝癌细胞系Hep3B的酪氨酸磷酸化蛋白质表达谱。3.与不转移人肝癌细胞系相比，转移性人肝癌细胞系中酪氨酸磷酸化蛋白质表达谱表现出明显的差异性。推测肝癌的侵袭转移性与细胞内多种差异表达的酪氨酸磷酸化蛋白质相关。4.应用RT-PCR，蛋白印迹，免疫细胞化学技术对筛选出的膜联蛋白Ⅰ进行再验证，结果显示前后一致。