白斑综合征病毒(White spot syndrome virus，WSSV)是引起对虾白斑综合征(White spot syndrome，WSS)的病原，其宿主十分广泛，包括人工养殖对虾及大部分野生虾蟹类等40余种，对虾在感染该病毒后2-7天死亡率可达100%，因此对全球虾养殖业危害较大。目前，NCBI上公布的WSSV全基因序列组只有三个，分别是泰国株(AF369029)，中国大陆株(AF332093)和中国台湾株(AF440570)，其同源性高达99.32%，但也存在一些主要的基因变异，其中之一为重复单元数量变化(variable number of tandem repeats，VNTR)。为了研究ORF94中重复单元数量变化的差异，本研究对分离自江苏和浙江省的野毒株进行了ORF94基因扩增、序列比对和重复单元数量变化的分析，并选取重复单元数量区别较大的两株分离株人工接种克氏原螯虾(Procambarus clarkii)记录死亡率，并探索VNTR与毒力的相关性。此外，病毒的囊膜对病毒的活动起到重要的作用，但目前关于该病毒囊膜蛋白间互作的研究鲜有报道，主要原因可能是缺乏有效细胞系。VP28是WSSV四个主要囊膜蛋白之一，其主要在病毒吸附和侵入过程中起作用。为了研究VP31和VP36A是否能与VP28之间发生相互作用，本研究对VP28、VP31和VP36A进行了克隆表达，纯化病毒并分离WSSV囊膜蛋白，利用Far-Western和Pull-Downassay的方法检测VP28与VP31和VP36A的互作。
　　根据GenBank上白斑综合征病毒(WSSV)泰国株ORF94的基因组序列设计一对引物，将从江苏和浙江采集已发病白斑综合症地区的对虾提取病毒DNA，对目的片段基因进行扩增，并插入pMD-18T载体中构建克隆载体pMD-N，测序后与GenB．ank中收录的其他WSSV毒株进行同源性比对，发现这些序列与GenBank中收录的WSSV毒株同源性高于95%，同时，重复单元ORF94的序列差异分析显示重复单元数量介于2至14之间，第48位碱基差异较大。选取重复单元数量区别较大的两株分离株，分别分离自江苏赣榆和大丰，人工接种克氏原螯虾记录死亡率计算半数致死量，赣榆株为10-5.6，大丰株为10-5.5。然后根据其半数致死量采取肌肉注射的方法对克氏原螯虾进行攻毒。每隔12小时观察并记录一次克氏原鳌虾的存亡情况，将死亡及未死亡的部分虾于-40℃冻存，按上述方法进行重复单元ORF94的序列差异分析，发现攻毒后再分离的毒株间重复单元数量无差异，而第48位碱基差异较小，所以ORF94的序列差异可能与病毒毒株强弱的相关性不大。剩余的死虾浸泡在DavidsonsAFA固定液中，再用戊二醛固定，按常规方法做超薄切片，观察细胞及病毒形态。
　　根据参考文献中的方法，利用NonidetP-40、TritonX-114和丙酮等处理纯化过的菌体，分离出WSSV的蛋白。再以白斑综合征病毒(WSSV)赣榆株为模板，设计三对引物，分别扩增得到了VP28、VP31和VP36A的片段，将其分别T-A克隆到pMD-18T载体后，再分别亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)和pGEX-4T-3中，然后将重组质粒转入宿主菌BL21中，在37℃下用1mM浓度的IPTG诱导三个片段均获得良好的表达。经SDS-PAGE鉴定，其表达的融合蛋白约为28kDa、57kDa和62kDa，与预期值一致。利用Far-Westem实验和Pull-Downassay实验检测VP28是否能与VP31或VP36A发生相互作用，结果是未发现它们之间有相互作用。