目的：　　金黄色葡萄球菌是一种常见病原菌，可引起多种感染。在我国流行的金黄色葡萄球菌主要是ST239型和ST5型。金黄色葡萄球菌的传播，流行及其所致感染类型与之分泌的多种粘附蛋白密切相关，这些粘附蛋白的表达受到多种调控系统的控制。有研究报道，新发现的粘附相关蛋白sasX可以促进ST239型和ST5型金黄色葡萄球菌在医院的传播。粘附蛋白的流行病学和功能研究很多，但是调控机制还不完全清楚，尤其是新发现的sasX蛋白，其调控机制还未见报道。有研究报道葡萄球菌附属基因调节子agr、葡萄球菌辅助调节因子sarA和双组分信号转导系统saeR主要调节各种分泌蛋白的表达，包括粘附和毒力蛋白。我们通过基因敲除方法构建了sarA、agrA、saeRS基因敲除突变株，对saeRS、agr和sarA对金黄色葡萄球菌主要粘附基因的调控机制进行了初步探讨。　　方法：　　首先利用PCR扩增金黄色葡萄球菌HS770的saeRS、sarA、agrA基因的上下游同源臂;用温度敏感型质粒pKOR1，分别构建没有目的DNA的重组质粒，经过大肠埃希菌DC10B的修饰，电转进入目的细菌HS770;经过不断的变温传代，使质粒上的同源臂与基因组上的目的DNA发生同源重组，再用脱水四环素诱导ccdB基因和反义secY RNA表达，筛选saeRS、sarA、agrA的疑似突变株;经过PCR、RT-PCR和测序鉴定得到HS770△agrA、HS770△saeRS以及HS770△sarA敲除突变株;用RT-PCR和Western-blot检测saeRS、sarA、agrA对sasX基因的转录及表达水平的影响;利用RT-PCR检测saeRS、sarA、agrA对spa，fnbpB，sasX转录水平的影响;同时分别检测野生株HS770以及HS770△saeRS、HS770△sarA、HS770△agrA敲除突变株的起始粘附能力和生物膜形成能力变化。　　结果：　　金黄色葡萄球菌临床分离株HS770。PCR检测saeRS、sarA、agrA、sasX阳性。将saeRS、sarA、agrA基因上下游DNA片段进行连接，所得连接产物与质粒pKOR1进行B-P反应得到pKOR1-△saeRS、pKOR1-△sarA、pKOR1△-agrA重组质粒，将重组质粒电转进HS770，发生同源重组，得到HS770△saeRS、HS770△sarA、HS770△agrA突变敲除株。用PCR、RT-PCR、测序的方法验证敲除成功。首先我们检测了野生株和各个基因敲除株的生长曲线，结果显示各菌的生长曲线基本相似，在稳定期后期agr突变株相对其他几株菌生长有所增快。抽取3h、6h、9h、12h野生株和各个基因敲除株的RNA， qRT-PCR检测sasX、spa、fnbpB的转录水平，与野生株对比，△sarA突变株中sasX基因在3h、6h、9h、12h均上调4倍4倍32倍32倍，spa，fnbpB6h、9h、12h转录下调;△agrA突变株中sasX基因在3h、6h、9h、12h分别升高32倍100多倍8倍以及2倍，spa，fnbpB6h、9h、12h转录明显上调;△saeRS突变株中三个基因变化不大。提取3h、6h、9h、12h野生株和三个基因敲除株的菌体蛋白用抗sasX多克隆抗体进行Western-blod，与野生株相比△sarA突变株中3h、6h、9h、12h表达量都增高，△agrA突变株中6h表达量减少，9h、12h表达量有所增加，△sae RS突变株中基本无变化。qRT-PCR与Western-blot结果提示saeRS对sasX、 spa、fnbpB可能没有调控，agrA对sasX、 spa、fnbpB存在负调控作用，sarA对sasX存在负调控作用，对spa、fnbpB正调控作用。检测了野生株和三个基因敲除株的起始粘附能力和生物膜形成能力:起始粘附能力基本没有变化;sarA突变敲除株生物膜形成能力下降很多，saeRS和agrA突变株生物膜形成能力基本没有变化。　　结论：　　1.基因敲除方法敲除临床分离株HS770的saeRS、agrA、sarA基因，得到HS770△saeRS、HS770sarA、HS770△agrA突变敲除株。　　2.金黄色葡萄球菌agr双组份系统负调控sasX、spa、fnbpB粘附基因的表达。　　3.金黄色葡萄球菌sarA蛋白负调控sasX粘附基因的表达，正调控spa、fnbpB粘附基因的表达。　　4.金黄色葡萄球菌saeRS双组份系统不调控sas、spa、fnbpB基因的表达。