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金属纳米簇由几个到近百个原子组成,是尺寸介于金属原子和纳米粒子之间的纳米材料,其光／电性质受到纳米簇尺寸的显著影响。由于强烈的电子限域效应，金属纳米簇产生了类似于分子的电子能带结构。近年来,以脱氧核糖核酸(DNA)为保护骨架合成的银纳米簇(DNA-AgNCs)作为一种新颖的荧光标记物,在生物标记、生物／化学传感等诸多领域得到了广泛应用。然而,DNA-AgNCs在很多方面还需深入研究,如DNA-AgNCs的稳定性尚未达到目前发展相对成熟的荧光纳米材料(如量子点等)的水平。因此,如何进一步提高银纳米簇荧光稳定性的问题,吸引了众多研究学者的关注。在本论文中,将探索以巯基DNA(DNA-SH)为模板合成稳定DNA-SH-AgNCs的新方法,并研究其性能。研究限制性内切酶的活性及抑制作用对于恶性肿瘤等疾病诊断、药物开发有重要意义。针对限制性内切酶检测方法灵敏度与准确性尚需进一步提高这一问题,利用限制性内切酶对特定位点的特异性识别、切割原理及DNA-AgNCs结构的改变导致其荧光信号变化的性质,设计了用DNA-AgNCs检测核酸限制性内切酶EcoRI活性的方法,实现了较低含量EcoRI高灵敏检测。本论文由以下三部分内容组成：在第一章中,首先介绍了DNA-AgNCs的性质、合成方法和应用的研究进展,然后综述了限制性内切酶检测方法的研究进展,并分析了各种方法的优缺点。在第二章中,探索了合成稳定DNA-SH-AgNCs的方法。以DNA-SH作为模板,合成了AgNCs,考察了其与以DNA为模板合成的AgNCs荧光发射性能及稳定性的差异。结果发现DNA-SH-AgNCs的荧光发射能力和稳定性都优于DNA-AgNCs。然后,通过质谱、圆二色光谱、循环伏安法和X射线光电子能谱等对形成的DNA-SH-AgNCs的组成、结构、抗氧化能力和Ag-S键的结合方式进行了研究和分析,推测是由于毓基和DNA的协同保护作用,使DNA-SH-AgNCs荧光发射强度增加,稳定性增强。在第三章中,设计了基于DNA-AgNCs无标记荧光“开-关”探针检测核酸内切酶的活性和抑制的新方法。这种检测酶活性方法的原理是富含G序列的DNA靠近带有EcoRI特异性切割位点的DNA-AgNCs时使其荧光增强。检测探针有两条单链DNA组成,其中一条链(DNA)含有EcoRI识别位点及5’-端成核序列能合成具有较弱荧光的DNA-AgNCs,另一条链(cDNA)与DNA部分互补且3’-端连有富含G的序列,当富含G序列的cDNA与DNA-AgNCs通过碱基互补配对靠近后,使其荧光信号剧增。而加入EcoRI后,通过特异性切割双链DNA,DNA-AgNCs与富含G序列的cDNA远离,荧光降低。本实验根据荧光信号的改变来检测EcoRI的活性大小,该方法对EcoRI的检测范围是5×10-4-3×10-3U/μl,检出限为3.5×10U/μl。同时,用此方法也进行了EcoRI抑制剂筛选的研究。以5-氟尿嘧啶作为抑制剂,得到IC50为0.10mM。该检测方法具有方便、高效、灵敏和银纳米簇荧光探针容易制备等优点。