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植物内生菌作为生活在植物组织内部的一大类微生物,在其生活史的一定阶段或全过程中对宿主植物不表现出病症,由于生活环境的特殊性,在生理生物学作用上与外界环境微生物都有所不同。在与植物长期共同进化过程中,植物内生菌与宿主之间形成了一种共生关系,外界环境条件与宿主植物代谢变化影响着植物内生菌的种类及其代谢发生的相应变化。植物内生菌作为一类特有的微生物资源已得到广泛的认同。其中植物抗菌内生菌能产生多种新的抗菌活性物质,不但可以帮助人类解决健康问题,也可以解决植物和动物健康问题。但现阶段对植物抗菌内生菌的研究刚刚开始,对其特性了解还不够深入,无法对其充分利用。因此,对植物抗菌内生菌的研究不仅能带来巨大的社会效益还具有现实的理论意义。 本实验主要选择了具有药用功效的植物石斛组织作为抗真菌内生菌分离材料,从中分离到四株具有抗真菌活性的DEB-1、DEB-2、DEB-3、DEB-4菌株,并进行了种属鉴定。选择了其中DEB-2菌株进行了抗真菌作用的初步研究。实验结果如下: 1、采用组织表面消毒的方法从金钗石斛和流苏石斛植物组织中分离出了46株植物内生菌,其中细菌5株,真菌41株。通过平板对峙法从5株细菌中筛选得到4株具有强烈拮抗真菌的内生细菌。代号分别为DEB-1、DEB-2、DEB-3、DEB-4。 2、通过形态学观察,菌株DEB-1、DEB-2、DEB-3、DEB-4在PDA培养基上菌体杆状,产生芽抱,芽孢不膨大为中生或近端生,革兰氏染色呈阳性,对其做生理生化特征测定,其接触酶阳性,运动性强,能水解淀粉,VP阳性,利用葡萄糖、甘露醇、木糖等各种糖类产酸,亚硝酸还原都为阳性,好氧,该菌在不同培养基上菌体的形态无很大的变化,生长的最适温度35℃。对内生菌DEB-1、DEB-2、DEB-3、DEB-4做16S-23SrDNA ITS序列测定,序列长度均为250bp左右,通过与GenBank核酸序列数据库中的序列进行比对,该菌与芽抱杆菌属下的一个菌株Bacillus polyfermenticus的序列同源性为99%,与其它类芽抱杆菌属下的其它种的序列相似性也在96-98%,基于16S -23SrDNA ITS序列构建了DEB-1、DEB-2、DEB-3、DEB-4与这些相关菌的系统发育树。 3、DEB-2菌株及其活性产物能强烈抑制几种植物病原菌如番茄灰霉病病原菌、小麦赤霉病病原菌、小麦纹枯病病原菌、玉米大斑病病原菌、黄花菜链格孢、辣椒立枯病病原菌、马铃薯晚疫病病原菌、水稻纹枯病病原菌、水果红粉病病原菌及一株人体病原菌;其次对食品腐败菌黑曲霉产生抑制,对几株植物内生菌也有抑制作用。被抑制的菌分布较广,分属于