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研究背景:系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus,SLE）是典型的多系统、多脏器损害的自身免疫性疾病,SLE以大量自身抗体形成为特征,是严重威胁人类健康的慢性重大疾病,发病以育龄期女性为主,我国SLE患者女性对比男性患者的比例为12:1。SLE的发病机制可能与遗传、激素、环境等多种因素相关,但其具体病因至今尚不明确。SLE的临床表现复杂多样,常常累及多系统,我国约半数SLE患者可累及肾脏,并有37.2%的患者并发血液系统疾病。目前SLE的治疗多依赖于长期糖皮质激素及免疫抑制剂的使用,随之易出现不同程度的药物副作用,这也显示出目前SLE治疗的局限性。Lnc RNA是长度大于200个核苷酸且不能编码蛋白的一类非编码RNA,通常具有与m RNA相似的结构。在机体的生物学过程中,lnc RNA可作为信号分子、诱饵分子和引导分子调节机体免疫功能。现有的研究已证实,lnc RNA可以在表观遗传水平、转录水平和转录后水平通过不同的途径对基因的表达实现调控,同时对先天性免疫细胞和适应性免疫细胞的成熟发挥调节作用,调节免疫细胞活化状态,维持免疫系统稳态,并影响着炎症基因的转录,以正反馈和负反馈调节的途径控制炎症基因在机体内的表达,这都提示lnc RNA可能是免疫系统中基因表达的关键调节子。目前的研究已经证实,lnc RNA在自身免疫性疾病的发生与发展中发挥关键作用,如常见的SLE、RA等疾病。相关研究表明,lnc RNA可以通过调控表观遗传,介导SLE疾病的发生与发展,其作用方式包括组蛋白修饰、微小RNA等,并对SLE治疗药物的效果有明显影响。然而lnc RNA在SLE中的具体作用机制仍然有待进一步的研究探索,前期我们通过转录组测序方法（RNA-seq）研究了SLE患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）差异表达的lnc RNA,从中筛选出SLE患者外周血中六个差异表达的lnc RNA:NRIR-1,NRIR-2,XLOC031958,RP11-288L9.1,AL92874212-1,AL92874212-2。本研究拟深入探讨其在SLE发病机制中的具体作用。第一部分:目的:验证前期转录组测序筛选出的差异表达lnc RNA,确定本研究的目的lnc RNA。方法:通过实时定量PCR（Quantitative real-time PCR,q RT-PCR）技术进一步验证差异lnc RNA的表达。结果:SLE患者PBMCs中RP11-288L9.1的表达水平较健康对照组上调最显著,故将lnc RNA RP11-288L9.1作为本研究的目的lnc RNA。结论:RP11-288L9.1可能在SLE的发病机制中起到重要作用。第二部分:目的:明确lnc RNA RP11-288L9.1在细胞中的定位;明确RP11-288L9.1表达水平对巨噬细胞增殖和凋亡的影响。方法:运用荧光原位杂交（fluorescencein situ hybridization,FISH）技术检测RP11-288L9.1的细胞定位;设计并构建lnc RNA RP11-288L9.1低表达和过表达重组慢病毒,转染构建RP11-288L9.1低表达和过表达模型,用q RT-PCR验证其转染效率。分别用CCK-8法和流式细胞仪检测试剂盒检测慢病毒转染后细胞的增殖和凋亡水平。结果:FISH结果显示,RP11-288L9.1定位在巨噬细胞胞浆中;q RT-PCR分别检测低表达和过表达RP11-288L9.1慢病毒转染后的巨噬细胞,和正常对照组比较,过表达组RP11-288L9.1的表达水平上升,低表达组RP11-288L9.1的表达的水平降低;利用流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示,RP11-288L9.1过表达组的巨噬细胞凋亡率相比于正常对照组有所升高,低表达组的巨噬细胞凋亡率相比于正常对照组较低;CCK8法细胞增殖检测结果显示,RP11-288L9.1过表达组的巨噬细胞增殖水平低于正常对照组,低表达组的巨噬细胞增殖水平高于正常对照组。结论:RP11-288L9.1可以促进巨噬细胞的凋亡并对巨噬细胞的增殖产生抑制作用。第三部分:目的:明确RP11-288L9.1对巨噬细胞相关炎症细胞因子IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10、TGF-β1的表达具有调控作用。方法:通过q RT-PCR技术检测在巨噬细胞中低表达和高表达RP11-288L9.1后,巨噬细胞相关炎症细胞因子IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10、TGF-β1表达情况。结果:在巨噬细胞中低表达RP11-288L9.1后,相关炎症因子IL-1β、IL-6表达水平显著下降,IL-4、IL-10、TGF-β1显著上升;而高表达RP11-288L9.1巨噬细胞中IL-1β、IL-6表达水平显著上升,IL-4、IL-10、TGF-β1表达水平显著下降。结论:RP11-288L9.1对免疫应答反应的调控作用可能是通过影响巨噬细胞相关炎症细胞因子的合成来实现的。机体免疫异常是SLE一个重要特征,巨噬细胞在机体免疫应答反应中有着至关重要的作用,在宿主防御和炎症反应中均扮演重要角色,巨噬细胞主要具有两种极化状态,即M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞。且巨噬细胞不同的极化状态,对机体的免疫应答反应有着不同的调控作用。极化的M1型巨噬细胞主要分泌促炎因子,如IL-1β、IL-6等,具有强大的抗原提呈能力及吞噬能力,对Th1免疫应答有较强的促进作用,同时,具有重要的抗胞内病原菌以及抗肿瘤的作用,所以在免疫应答反应中发挥着重要的促炎作用。M2型巨噬细胞主要分泌抗炎细胞因子如IL-4、IL-10、TGF-β1等,这些细胞因子主要通过其抗炎作用来发挥免疫调控作用,同时,对机体组织修复及伤口愈合具有重要的促进作用。我们的研究表明:RP11-288L9.1可以调节炎症细胞因子的表达水平,进而对巨噬细胞的极化状态产生影响,并由此可能通过增强巨噬细胞抗原提呈及吞噬能力,对Th1免疫应答产生促进作用,最后引起机体炎症的进一步发展。这可能是SLE发生发展的机制之一,本研究为揭示SLE的病因机制及临床治疗开拓了新的视角。