论文部分内容阅读
目的基于iTRAQ技术的艾滋病热毒蕴结证患者与健康人之间蛋白质差异表达的蛋白组学研究基础上,通过Western Blot技术对显著性差异蛋白进一步临床验证及中药干预研究,观察特征性蛋白在表达变化情况,探索药物疗效与证候特征性蛋白表达变化之间规律,为艾滋病热毒蕴结证具有诊断及疗效评价意义的蛋白分子标志物研究提供实验依据,指导临床中医艾滋病证候诊断和疗效评价。方法本研究应用艾复康胶囊联合高效抗逆转录病毒治疗(HAART)干预艾滋病期热毒蕴结证患者,疗程为48周。分别于0周、48周采集全血及提取后血清样本,检测血细胞、病载、CD4+T、肝肾功等临床基线指标。基于前期iTRAQ技术研究基础上,采用蛋白质印迹法(Western Blot)技术分别对采集的AIDS热毒蕴结证患者和健康对照组、热毒蕴结证患者用药前后血清标本进行差异蛋白检测,运用image J软件分析灰度值,将每泳道所得出目的蛋白的灰度值与相应的白蛋白灰度值做比较,得出相对灰度值,然后将每种抗体中的正常组的相对灰度值和病人组的相对灰度值导入至GraphPad Prism 5软件,得出nean+/-SD的图表。采用SPSS20.0统计软件统计相关临床资料。结果1、艾滋病期热毒蕴结证组与正常对照组比较,C5在艾滋病期热毒蕴结证表达下调,差异有统计学意义(P<0.05),与iTRAQ筛选结果一致；keratin 10在艾滋病期热毒蕴结证表达下调,差异有统计学意义妒<0.05),与iTRAQ筛选结果一致。2、艾滋病期热毒蕴结证患者药物干预后48周后与治疗前比较,CD4+T、CD8+T趋于稳定升高,CD4+T具有统计学意义(P<0.05),CD8+T无统计学意义。3、艾滋病期热毒蕴结证用药前后比较,C5在艾滋病期热毒蕴结证用药后表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1、本研究得出艾滋病艾滋病期热毒蕴结证特征性蛋白质分别为C5、keratin10,这两者有助于为艾滋病期热毒蕴结证中医候诊断提供客观化依据。上述蛋白功能主要涉及应激反应、体液免疫应答、补体激活和先天免疫等,可能是热毒蕴结证相关生物学特征性蛋白质。2、本研究得出C5蛋白表达变化水平与艾滋病热毒蕴结证中药辨证论治治疗疗效趋势呈一致性,对于艾滋病热毒蕴结证的治疗具有疗效评价意义。3、本研究获得艾滋病艾滋病期热毒蕴结证验证及疗效干预的特征性表达蛋白,为建立艾滋病中医证候诊断模式,完善艾滋病辨证规范和辨证方法奠定基础。