黄曲霉毒素B1(AFB1)是已知的黄曲霉毒素中研究最深也是毒性最强的一类霉菌次级代谢产物。肉鸡摄入经AFB1污染的饲料,通常会引起中毒,降低肉鸡的免疫力,并造成严重的经济损失。经证实,肝脏是蓄积和代谢AFB1的主要器官,AFB1经肝脏代谢产生的有毒代谢产物残留在肉鸡体内,可以造成肉鸡肝损伤甚至癌症;残留在肉鸡组织中的AFB1的代谢物通过食物链可被人类摄入,从而产生公共卫生危害。目前,关于肉鸡体内的CYP2A6在AFB1致肉鸡亚慢性肝损伤中所扮演的角色尚不明确。姜黄素是从姜黄根茎中提取的多酚类化合物,具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等作用。近期研究表明,姜黄素在脂肪肝综合征、肝炎、肝硬化和肝癌等肝脏疾病中起着保护肝脏的作用。姜黄素能否通过影响细胞色素酶p450表达尤其是CYP2A6对AFB1诱导AA肉鸡亚慢性肝损伤发挥保护作用尚不清楚。研究表明,AFB1属于前致癌物,须通过肉鸡肝脏的细胞色素酶p450的生物活化后才能发挥其毒性和致癌作用,且代谢酶存在种属的差异。已有文献报道证明,人类肝脏中CYP2A6以及鼠源的CYP2A5是同源物,分别为人或鼠体内催化AFB1代谢活化为若干种致癌物质(毒物)的CYP450酶。而肉鸡体内生物活化AFB1的关键酶尚不清楚。本实验不仅确认了AA肉鸡肝脏细胞色素酶CYP2A6的部分基因序列,证实了其在AFB1生物转化中的作用,且证明了姜黄素能通过抑制CYP2A6酶表达保护肉鸡肝脏缓解肝损伤。1日龄AA肉鸡适应性饲养3日后随机分为6组:空白对照组(正常饲料)、姜黄素对照组(450mg/kg饲料),低剂量姜黄素组(150 mg姜黄素+5 mg/kg AFB1),中剂量姜黄素组(300mg姜黄素+5 mg/kg AFB1),高剂量姜黄素组(450 mg姜黄素+5 mg/kg AFB1)和AFB1攻毒组(5 mg/kg AFB1+饲料)。连续饲喂28日后,处死实验动物,采集肝脏进行后续实验分析。病理组织学结果表明,与空白对照组和姜黄素对照组相比,AFB1攻毒组的肝脏存在明显的损伤。添加姜黄素可抑制AFB1诱导的肉鸡肝脏毒性。与姜黄素低剂量组相比,中、高剂量姜黄素可明显改善肝细胞形态学的异常变化。AFB1组肝脏重量显著增加(P<0.05),体重显著降低(P<0.05)。随着姜黄素添加量的增多,肝体比呈剂量依赖性降低(P<0.05)。与空白对照组相比,AFB1攻毒组CYP1A1、CYP1A2和CYP3A4的mRNA表达水平显著升高,CYP2A6 mRNA和蛋白质表达水平显著升高,表明以上4种细胞色素酶(CYP1A1、CYP1A2、CYP3A4和CYP2A6)是肉鸡肝脏内生物活化AFB1的主要Ⅰ相代谢酶。值得注意的是,AFB1攻毒组肉鸡肝脏CYP2A6的酶活性显著增加(P<0.05),表明CYP2A6是肉鸡肝脏生物转化AFB1的关键酶。添加姜黄素对CYP2A6的mRNA活性和蛋白表达产生了抑制作用,且呈剂量依赖,其中高剂量姜黄素(450 mg姜黄素+5 mg/kg AFB1)的抑制作用最为显著。除此之外,本实验还检测了姜黄素对肉鸡肝脏参与AFB1活化的CYP1A1、CYP3A4和CYP1A2的抑制作用。与空白对照组相比,高剂量姜黄素组中上述三种细胞色素酶的mRNA表达水平显著降低(P<0.05),且三种CYP同工酶的抑制趋势相似。实验数据表明,姜黄素可通过抑制细胞色素同工酶的活性进而阻止AFB1在AA肉鸡肝脏内的生物活化,减少了有害物质的生成,研究结果为姜黄素的进一步开发利用提供了科学依据。本实验首次证明了CYP2A6酶对AA肉鸡肝脏生物活化AFB1的关键作用。此外通过本论文还证明了姜黄素通过抑制CYP2A6分子表达和酶活性进而产生保肝作用的作用机理。本论文得创新点在于确认了一种肉鸡肝脏生物转化AFB1至关重要的细胞色素酶,研究结果为进一步研究AFB1的有害作用及其防治提供了理论基础。