实时荧光PCR检测转基因农产品的研究

来源 :湖南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nimadehundan
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对转基因产品的安全性,特别是转基因食品对人和动物的健康及对生态环境的影响,自转基因技术出现以来,就一直是世界各国及联合国等国际组织关心的焦点问题,先后出台了一系列的相关政策和规定,其中许多国家限制了转基因的最低含量,阈值大小从1-5%不等.虽然联合国所属机构(FAO、WHO等)及一些地区性国际组织在召集建立世界统一的检测技术和方法标准,但由于对于转基因产品的安全性、风险管理措施及其它利益等方面的不一致,目前各国尚难达成一致的意见.为了能有效地检测转基因产品,我们已收集了国内外已商品化的转基因作物品种的基因构建图,选择了能覆盖全部已商品化转基因品种的7个基因作筛选目标(35S、nos、nptⅡ、pat、bar、FMV、cry3A),设计了多条特异性引物和荧光探针,利用荧光PCR方法进检测,相对检测灵敏度达到0.1%.目前已建立了转基因荧光定性PCR检测体系及转基因大豆Roundup Ready和转基因玉米Bt-176的荧光定量检测体系.同时采用UNG去污染酶,将PCR产物污染的可能性降到最低.为进一步确认所检基因,我们将部分PCR产物克隆到T-载体上,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,经测序结果表明,扩增产物与GeneBank中的序列同源性达99.9%以上.同时还克隆了两个全长基因做阳性对照.该论文在国内首次建立了转基因荧光PCR检测方法,并与公司合作推出配套试剂盒.这对今后进出口转基因产品的检测将产生深远的影响,并具有重要的现实意义.
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