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分化抑制因子(Inhibitor of differentiation or inhibitor ofDNA-binding,Id),是一组缺乏结合DNA功能的螺旋-环-螺旋(helix-loop-helix,HLH)转录因子,通过与碱性HLH(bHLH)结合形成异二聚体而影响受bHLH调控的细胞特异性基因的表达。在人类,迄今共发现四种Id蛋白即Id1～Id4。人Id3基因定位于染色体lp36.1。Id3参与多种细胞的生物学过程,包括T细胞和B细胞的发育、骨骼肌的分化、血管平滑肌的增殖、胚胎的神经形成、骨发生和肿瘤诱导的血管发生等。新近研究表明,Id3基因表达调控的途径和机制的复杂性决定了其功能的多样性,在肿瘤细胞的发生、分化、增殖和凋亡中发挥着重要作用。目的:探讨人Id3基因体外转染耐顺铂人肺腺癌细胞株A549/DDP细胞后对其凋亡及抗肿瘤药物顺铂(DDP)的敏感性的影响。方法:在前期构建人Id3基因和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)真核表达载体Id3/pEGFP的基础上,采用脂质体介导的转染技术将Id3融合基因(Id3-pEGFP)导入A549/DDP细胞,倒置荧光显微镜下观察细胞内EGFP的表达;半定量RT-PCR和Western-blotting检测Id3表达的改变;流式细胞术(FCM)检测Id3对A549/DDP细胞凋亡的影响,Hoechst33258染色观察转染的细胞核形态学变化,MTT法观察Id3对细胞增殖功能的影响,加入不同浓度的顺铂对转染后的A549/DDP细胞增殖的抑制情况。结果:RT-PCR和Western-blotting结果显示,Id3 mRNA及蛋白在转染Id3/pEGFP的A549/DDP细胞的表达明显上调;倒置荧光显微镜下,可见转染的A549/DDP细胞发出强绿色荧光,转pEGFP组的荧光均匀分布于整个细胞内,而转Id3/pEGFP组的荧光主要表达于细胞核;Annexin V/7-AAD双染联合Hoechst染色结果表明,Id3/pEGFP转染组细胞的早期凋亡率明显高于pEGFP转染组和未转染组;MTT法结果表明,转染Id3/pEGFP的细胞增殖被抑制,顺铂对转染Id3的A549/DDP细胞的增殖抑制率明显增加,对DDP的易感浓度降低,半数抑制浓度(IC50)下调。结论:外源性Id3基因在A549/DDP细胞中的表达能抑制该细胞的增殖并诱导其凋亡,Id3能增强A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。