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目的糖尿病肾病(DN)的发病机制尚未完全明了,TGF-β1-p38 MAPK信号途径的激活是DN发生发展的分子机制之一。β2-糖蛋白Ⅰ(β2-GPI)自被发现作为抗磷脂综合征的自身抗原以来,其不同构象表型及特殊的功能越来越被人们所重视。还原型β2-GPI作为一种游离巯基形式的β2-GPI,其生理生化的机制也在不断的探讨之中。目前为止,关于β2-GPI及还原型β2-GPI在DN方面的研究未见报道。本研究首先通过临床试验,探讨β2-GPI及还原型β2-GPI水平与糖尿病患者肾病进展程度的关系。进一步通过体内和体外实验,探讨β2-GPI及还原型β2-GPI对DN肾脏的作用以及高糖环境下系膜细胞产生ECM的影响。从对TGF-β1-p38 MAPK信号途径的影响,阐明β2-GPI及还原型β2-GPI在体内和体外实验中的作用。方法1.以天津医科大学代谢病医院2型糖尿病的住院病人为研究对象,采用ELISA法检测血清中β2-GPI及还原型β2-GPI的水平,并与反映糖尿病患者临床肾病的指标(Cr、BUN、24小时尿微量白蛋白及尿白蛋白定量)进行相关性分析,观察β2-GPI及还原型β2-GPI水平与DN进展程度的关系。2.以链脲佐菌素(STZ)诱导的BALB/c DN小鼠为研究对象,分别静脉给予β2-GPI及还原型β2-GPI干预,通过免疫组化技术、real-time PCR和Western blot方法观察不同时间梯度β2-GPI及还原型β2-GPI对肾小球组织结构及肾皮质CollagenⅣ表达的影响。3.以高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞为研究对象,通过real-time PCR和Western blot方法观察不同浓度梯度β2-GPI及还原型β2-GPI对系膜细胞CollagenⅣ表达的影响。4.通过real-time PCR和Western blot方法观察STZ诱导的DN小鼠及高糖环境下大鼠系膜细胞TGF-β1、p38 MAPK及磷酸化p38 MAPK的表达,探讨β2-GPI及还原型β2-GPI干预后的影响。结果1.β2-GPI血清含量与BUN、Cr、24小时尿微量白蛋白及尿蛋白均无相关关系(P>0.05)。还原型β2-GPI血清含量与BUN、Cr无相关关系(P>0.05),与24小时尿微量白蛋白及尿蛋白呈正相关(r=0.328/0.301,P<0.01)。2.除3周的β2-GPI干预组外,其他干预组Cr、BUN水平及24小时尿白蛋白较DM组明显减低(P<0.05)。6周的还原型β2-GPI干预后,肾指数水平降低显著(P<0.05)。HE、Masson及PAS染色的结果显示,β2-GPI及还原型β2-GPI干预后,肾小球的组成结构、间质纤维化的程度及毛细血管丛基底膜增厚均有明显改善。免疫组化结果发现,经6周β2-GPI及还原型β2-GPI干预后,肾小球中Ⅳ型胶原(CollagenⅣ)阳性染色减轻明显。经β2-GPI及还原型β2-GPI干预后,肾皮质中CollagenⅣm RNA及蛋白表达水平均有不同程度减轻,随着干预时间延长,减轻程度越加明显,且经6周的还原型β2-GPI干预后效果最为显著(P<0.05)。3.进行β2-GPI及还原型β2-GPI干预后,高糖条件下的大鼠系膜细胞中CollagenⅣm RNA及蛋白表达水平均有不同程度减轻(P<0.05)。随着干预浓度的增加,CollagenⅣm RNA表达水平减轻的程度逐渐明显。CollagenⅣ蛋白表达水平对还原型β2-GPI有一定的浓度依赖趋势。4.经过6周β2-GPI及还原型β2-GPI干预,肾皮质TGF-β1阳性染色减轻明显。经过β2-GPI及还原型β2-GPI干预后,肾皮质中TGF-β1 m RNA及蛋白表达水平均有不同程度的减轻(P<0.05),且对还原型β2-GPI干预有一定的时间依赖趋势。经过β2-GPI及还原型β2-GPI干预后,高糖条件下的大鼠系膜细胞TGF-β1 m RNA及蛋白表达水平均有不同程度的减轻(P<0.05)。且随着干预浓度的增加,TGF-β1 m RNA表达水平减轻的程度逐渐明显,TGF-β1蛋白表达水平对还原型β2-GPI干预有一定的浓度依赖趋势。经还原型β2-GPI及长时间β2-GPI干预后,STZ诱发的DN小鼠肾皮质中p38MAPK磷酸化水平减轻明显(P<0.05)。经大剂量β2-GPI及还原型β2-GPI干预后,高糖环境下大鼠系膜细胞p38 MAPK磷酸化水平抑制显著(P<0.05)。结论1.2型糖尿病患者中还原型β2-GPI与肾病损害指标相关。2.β2-GPI及还原型β2-GPI可减少DN小鼠尿蛋白排泄;减轻肾脏病理损害,延缓DN的发展;下调肾皮质CollagenⅣm RNA及蛋白水平的表达,从而减少细胞外基质积聚,延缓肾小球硬化的发生发展。3.β2-GPI及还原型β2-GPI可以很大程度上抑制高糖诱导的大鼠系膜细胞CollagenⅣm RNA及蛋白的表达。4.β2-GPI及还原型β2-GPI能一定程度地减少STZ诱发的DN小鼠及高糖环境下大鼠系膜细胞TGF-β1及p-p38 MAPK的表达,推测其可能通过TGF-β1-p38 MAPK信号转导途径保护DN小鼠肾病的进展及高糖诱导系膜细胞的损伤