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[目的]探讨长链非编码RNA(longnon-coding RNA,lncRNA)TP53TG1在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞系中的表达模式,研究其对DLBCL细胞的迁移、侵袭、细胞周期及凋亡的影响,并初步探讨lncRNA TP53TG1对PLK1基因的调控关系。[方法]1.采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证PLK1及lncRNA TP53TG1在GCB-DLBCL细胞系(OCI-ly1)及ABC-DLBCL(OCI-ly3)细胞系中的表达模式。2.构建lncRNA TP53TG1慢病毒过表达载体与合成lncRNA抑制剂,分别瞬时转染至DLBCL的OCI-ly1及OCI-ly3细胞,采用RT-qPCR检测转染效率。3.RT-qPCR和蛋白免疫印迹(Western blot)检测在上调和下调lncRNA TP53TG1后,PLK1表达水平的变化。4.利用Transwell迁移侵袭实验、流式细胞仪检测在上调和下调lncRNA TP53TG1对OCI-ly1及OCI-ly3细胞迁移、侵袭、细胞周期及凋亡的影响。[结果]1.PLK1在OCI-ly1及OCI-ly3细胞中高表达。分别提取LCL7、OCI-ly1、OCI-ly3细胞中的总RNA,逆转录后RT-qPCR结果显示,与对照组LCL7组比较,PLK1 mRNA在OCI-ly1及OCI-ly3组中高表达(P<0.05)。2.LncRNA TP53TG1在OCI-ly1细胞中低表达,在OCI-ly3细胞中高表达。用检测PLK1 mRNA的同一批cDNA,采用RT-qPCR检测lncRNA TP53TG1,结果显示,与对照组LCL7细胞比较,lncRNA TP53TG1在OCI-ly1细胞中低表达,在OCI-ly3细胞中高表达(P<0.05)。表明lncRNA TP53TG1可以作为差异基因,用于后续实验。3.上调lncRNA TP53TG1后OCI-ly1细胞迁移侵袭减少,细胞周期在G2期阻滞。过表达慢病毒质粒酶切电泳结果与预期相符,质粒测序结果经BLAST比对显示,目的基因的过表达质粒pHS-AVC-LW1020与设计的过表达序列吻合率100%,证明载体构建成功。利用过表达慢病毒质粒、HEK293T细胞以及慢病毒包装试剂盒,进行慢病毒包装。慢病毒转染OCI-ly1细胞,荧光显微镜观察显示转染组携带绿色荧光的细胞数达70%;RT-qPCR验证转染效率,结果显示过表达组中lncRNA TP53TG1的表达水平明显高于NC组及空白组(P<0.05)。提示转染有效,可进行后续实验。Transwell迁移侵袭实验结果显示:过表达组细胞的迁移侵袭率较NC组及空白组明显降低(P<0.05),表明过表达lncRNA TP53TG1可抑制OCI-ly1细胞迁移侵袭。流式细胞仪检测OCI-ly1细胞凋亡及细胞周期结果显示:过表达组的细胞凋亡与NC组及空白组相比,未见明显差异(P>0.05),但过表达组可见明显细胞坏死;过表达的细胞生长周期中G2期细胞比例明显比NC组及空白组高(P<0.05),提示表达lncRNA TP53TG1可以使OCI-ly1细胞阻滞在G2期。4.下调LncRNA TP53TG1后OCI-ly3细胞迁移侵袭减少,凋亡增加,细胞周期在G2期阻滞。将RiboTM h-lncRNA TP53TG1 Smart Silencer瞬时转染至OCI-ly3细胞用于干扰lncRNA TP53TG1的表达,48h后提取细胞总RNA,RT-qPCR验证转染效率,结果显示干扰组中lncRNA TP53TG1的表达水平明显低于NC组及空白组(P<0.05),提示转染有效,可进行后续实验。Transwell迁移侵袭实验结果显示:干扰组的迁移侵袭率较NC组及空白组明显降低(P<0.05),表明干扰lncRNA TP53TG1可抑制OCI-ly3细胞迁移侵袭。流式细胞仪检测OCI-ly3细胞凋亡及生长周期结果显示:干扰组的细胞凋亡率明显高于NC组及空白组(P<0.05);干扰组的细胞周期中G2期细胞比例明显比NC组及空白组高(P<0.05)。表明干扰lncRNA TP53TG1的表达,可以诱导OCI-ly3细胞凋亡,使细胞阻滞在G2期。5.上调lncRNA TP53TG1后PLK1表达降低。将已转染成功的细胞同一批cDNA,用RT-qPCR检测PLK1 mRNA的表达,结果显示:过表达组的PLK1 mRNA的相对表达量明显低于NC组及空白组(P<0.05);Western blot结果显示:过表达组的PLK1的蛋白表达明显低于NC组及空白组(P<0.05),表明lncRNA TP53TG1可以调控PLK1。6.下调lncRNA TP53TG1后PLK1表达增加。将已转染成功的细胞同一批cDNA,用RT-qPCR检测PLK1 mRNA的表达,结果显示:干扰组的PLK1 mRNA的相对表达量明显高于NC组及空白组(P<0.05);Western blot结果显示:干扰组的PLK1的蛋白表达明显高于NC组及空白组(P<0.05),表明lncRNA TP53TG1可以调控PLK1。[结论]通过上调OCI-ly1细胞和下调OCI-ly3细胞中lncRNA TP53TG1后,可诱导OCI-ly1及OCI-ly3细胞阻滞在G2期,并降低细胞迁移侵袭能力,其机制可能是通过调控PLK1作用。