驱动蛋白Kinesin-1轻重链的相互作用及其复合物晶体学研究

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生物体内,分子马达是一类能将三磷酸腺苷ATP的化学能,转化为动能的生物大分子物质。在真核细胞中,起物质运输功能的分子马达有三大类:肌球蛋白,动力蛋白以及驱动蛋白。其中肌动蛋白沿着微丝运输货物,而动力蛋白和驱动蛋白则以微管作为轨道。三者运输的货物多种多样,包括膜结构的囊泡,蛋白复合物,信使RNA与细胞器等等。在极化的细胞中,例如神经元细胞,各种货物的亚细胞定位显得尤为重要。在一些神经衰退性疾病中,如阿尔兹海默症和亨廷顿舞蹈症等,发病机理与分子马达功能的缺失密不可分。当分子马达的功能缺失后,引起细胞内物质运输的混乱,进而影响生命活动的正常进行。本文以驱动蛋白超级家族中的Kinesin-1亚家族为研究对象,探索Kinesin-1的轻链和重链的相互作用关系。轻链介于运输货物和重链之间,在物质运输中极为重要。我们运用大肠杆菌原核表达系统表达纯化鼠源Kinesin-1家族的KIF5B蛋白,轻链mKLC2蛋白以及人源的轻链hKLC3和hKLC4蛋白。在体外条件下,我们鉴定了两者的核心结合区域,即mKIF5B蛋白的第781位至821位范围内的这40个氨基酸残基。同时我们获得了驱动蛋白轻链mKLC2和重链mKIF5B的复合物晶体。运用X-射线蛋白质晶体学的手段,获得8埃米的衍射图谱。还有待于进一步的晶体筛选和优化。我们通过多角度静态光散射实验,分析出驱动蛋白轻链mKLC2和重链mKIF5B形成复合物时各自的比例为2:2。推断出复合物的模型为:两条重链形成二聚体结构,每条重链结合一条轻链。
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