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背景随着糖尿病(diabetes mellitus,DM)发病率逐年上升,糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)也已成为终末期肾病(end stage renal disease,ESRD)的重要组成部分,且已严重影响了患者的健康水平,给家庭及社会造成沉重负担。近年来足细胞损伤与DKD发病之间的关系已成为研究热点。本课题组认为血热是早中期DKD的重要病机,以清热凉血法治疗早中期DKD临床疗效明显,在此基础上自拟消渴肾方治疗DKD。本研究在前期研究的基础上,建立早中期DKD小鼠模型,通过检测早中期DKD小鼠足细胞相关蛋白的表达和分布,明确消渴肾方对DKD的治疗作用是通过保护足细胞来实现的,为其治疗本病的疗效提供科学依据。由于DKD病因不明确且发病机制复杂不统一,高血糖状态下,各种细胞的活动异常,信号通路的传导发生改变、产生大量细胞因子,这些细胞因子被激活,并且发生复杂的相互作用,参与DKD的发生和发展。对DKD发病机制研究的不断深入为复方中药多靶点的作用优势提供了广阔的运用空间。在传统中医药理论的基础上,本课题旨在寻求安全、有效、作用靶点明确的中药产品,延缓DKD患者的疾病进展,减轻家庭及社会负担。导师认为,“血热”是DKD的主要病机,治疗重点是“清热凉血”,并自拟消渴肾方,以此指导临床治疗并取得一定疗效,本研究拟探讨消渴肾方作用机制,为其治疗本病的疗效提供理论依据,为现代中医药的发展和DKD的治疗作出积极贡献。目的通过动物实验,观察消渴肾方对DKD小鼠一般情况、24hU-Pr、血糖、肾功能、肾脏病理和足细胞相关蛋白表达的影响,为消渴肾方治疗DKD提供实验依据。方法1选择45只健康雄性db/db小鼠和15只db/m小鼠,适应性喂养1周后(期间自由饮食及摄食),称重并进行基础状态观察,随机分为正常组(db/m组)、模型组(db/db组)、西药组(db/db+氯沙坦钾组)、中药组(db/db+消渴肾方组),每组各15只。中药组给予中药复方消渴肾方颗粒灌胃治疗,西药组给予氯沙坦钾灌胃治疗,正常组和模型组给予相同剂量的去离子水,连续胃内给药12周。2观察小鼠的一般情况,分别于适应性喂养1周后、用药2周、用药4周、用药8周、用药12周后称取小鼠体重;适应性喂养1周后及灌胃结束后检测24hU-Pr;适应性喂养1周后、用药6周后检测血糖;灌胃结束后从眼眶静脉取血样用于检测生化指标;取各组小鼠肾组织进行石蜡包埋切片,进行PAS染色观察肾组织病理变化;WB检测足细胞相关蛋白表达。3 SPSS22.0进行数据的统计,以P<0.05表示差异有统计学意义。结果1小鼠一般情况正常组小鼠一般状况良好,体重增长趋势稳定缓慢,活动灵敏,皮毛有光泽,饮食正常,饮水量适中:模型组中实验小鼠明显肥胖,萎靡,活动减少,灵敏度减弱,毛发粗糙,反应迟钝,饮食量及尿量增加,大便稀溏,少部分小鼠出现皮肤溃疡等现象;治疗后,中药组和西药组的情况有所改善。治疗前,db/db小鼠体重明显高于正常组(P<0.01);治疗后,中药组和西药组小鼠体重均低于模型组(P<0.05,P<0.01);中药组和西药组无显著差异(P>0.05)。2 24小时尿蛋白定量治疗前,各组db/db小鼠尿蛋白明显较正常组升高(P<0.01);治疗后,模型组尿蛋白高于正常组(P<0.01);中药组和西药组小鼠尿蛋白均低于模型组(P<0.01);中药组和西药组比较无显著差异(P>0.05)。3血糖治疗前,各组db/db小鼠血糖较正常组明显升高(P<0.01);治疗后,与模型组相比中药组、西药组小鼠血糖无明显变化(P>0.05)。4肾功能模型组小鼠尿素氮高于正常组(P<0.05);中药组和西药组小鼠尿素氮较模型组降低(P<0.01)。与正常组相比,各组小鼠血肌酐均有不同程度的升高(P<0.05),中药组、西药组小鼠血肌酐与模型组之间无明显差异(P>0.05).5肾组织病理学观察光镜观察:在正常组小鼠的肾组织中未观察到病理变化;模型组小鼠肾脏病理表现肾小球囊狭窄,肾小球毛细血管基底膜增厚,系膜区明显增宽伴大量紫红色糖原物质沉积,系膜基质增多;肾小管管腔内有红色的糖原物质沉积,部分肾小管上皮细胞空泡样变性,胞质空泡化;中药组、西药组肾组织病理改变较模型组均有不同程度的缓解。6 肾皮质中Nephrin、Podocin、Podocalyxin的表达药物干预12周后,检测各组小鼠肾脏中Nephrin、Podocin、Podocalyxin蛋白的表达,模型组小鼠肾小球Nephrin蛋白的表达较正常组显著降低(P<0.01),中药组、西药组小鼠肾小球的Nephrin蛋白的表达水平均较模型组升高(P<0.01,P<0.05);模型组小鼠肾小球Podocin蛋白的表达较正常组显著降低(P<0.01),中药组、西药组小鼠肾小球的Podocin蛋白的表达水平均较模型组升高(P<0.01,P<0.05);模型组小鼠肾小球Podocalyxin蛋白的表达较正常组降低(P<0.05),中药组小鼠肾小球的Podocalyxin蛋白的表达水平均较模型组升高(P<0.05),西药组小鼠肾小球的Podocalyxin蛋白的表达水平与模型组相比无明显差异(P>0.05)。结论1消渴肾方可降低db/db小鼠体重。2消渴肾方可降低db/db小鼠蛋白尿。3消渴肾方可改善db/db小鼠肾脏病理损伤情况。4消渴肾方可上调db/db小鼠足细胞Nephrin、Podocin及Podocalyxin蛋白的表达。