井冈霉素诱导ILP2调控褐飞虱雌虫生殖和种群变化的机制

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褐飞虱(半翅目、飞虱科)是一种典型的农药诱导的再猖獗型水稻害虫。最近有研究报道井冈霉素刺激褐飞虱生殖主要与脂肪酸代谢有关。除此之外,井冈霉素刺激褐飞虱生殖是否还有其它调控途径尚不清楚。我们进一步分析了井冈霉素处理的褐飞虱(羽化后2d)数字基因表达谱数据,筛选出药剂诱导胰岛素信号通路中表达显著上调基因ILP2基因。然而,井冈霉素刺激褐飞虱生殖是否与胰岛素信号通路中ILP2基因表达上调有关还不清楚。本论文采用RNAi、生物测定、qRT-RCR、Western blot和免疫荧光等方法,探索ILP2调控褐飞虱生殖和种群增长的机制。主要结果如下:1、井冈霉素处理后羽化2d的褐飞虱雌成虫转录组学分析我们的研究利用RNA-seq测序技术,对井冈霉素处理后羽化2d的褐飞虱进行了转录组学分析,共鉴定出差异基因1165个(上调557个,下调608个)。通过本次分析共得到317条Pathways,其中与激素及其生殖调节相关的Pathways共16条,通过pathway注释与富集分析,筛选出井冈霉素处理后类胰岛素多肽基因(Insulin-like peptides 2,ILP2)显著上调,采用qRT-PCR法验证井冈霉素处理对ILPs(1-4)基因表达水平的影响并进行RNAi以进一步证实该基因在营养通路中药剂刺激生殖的分子机制。为进一步研究ILP2基因的功能提供理论依据。2、沉默类胰岛素多肽-2(ILP2)基因对褐飞虱生殖及其子代种群增长的影响我们的研究采用dsRNA饲喂法研究褐飞虱雌虫体内ILP2基因的功能。研究结果表明ILP2基因在雌虫羽化后(1d、3d、5d和7d)表达量显著下降了约36.4%~74.6%;JGM(井冈霉素)+dsILP2处理后,褐飞虱的产卵量显著下降了约63%,产卵前期延长了约36%,产卵历期减少了约28%及子代种群数量减少57.4%和卵孵化率下降17.7%,但子代性别比没有显著影响。沉默ILP2基因表达后使羽化2d、4d和6d的雌虫卵巢不同程度上的发育延迟,同时脂肪体和卵巢内蛋白质含量也分别下降了约66%和59%及在羽化后2d和3d雌虫体内Vg表达量分别下降了约45%和37%。通过Western blot分析表明,羽化后2d的褐飞虱雌虫体内Vg表达量也显著下降。采用免疫荧光(IF)检测,发现JGM+dsILP2处理羽化后2d的雌虫体内Vg的荧光信号与JGM处理的相比信号显著减弱。脂肪体内类酵母共生菌含量与对照相比显著下降了约48%。进一步检测结果表明JGM+dsILP2处理的褐飞虱雌虫羽化后2d体内胰岛素含量显著下降了约34%,保幼激素含量下降了约19%,蜕皮激素含量增加了约30%,进一步也导致羽化2d的雌虫体重减轻,体型变小。
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