【摘 要】
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目的:探讨破骨分化过程中重要的两个因子:巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)分别在骨髓间充质干细胞(BMSCs)中过表达对破骨、成骨相关因子的影响。方法:全骨髓贴壁培养法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,分别构建过表达质粒载体上调M-CSF基因和RANKL基因的表达。使用增强型绿色荧光蛋白(EGFP)确定最佳转染剂量,并将两种质粒分别转染大鼠骨髓间充质干细胞。用
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目的:探讨破骨分化过程中重要的两个因子:巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)分别在骨髓间充质干细胞(BMSCs)中过表达对破骨、成骨相关因子的影响。方法:全骨髓贴壁培养法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,分别构建过表达质粒载体上调M-CSF基因和RANKL基因的表达。使用增强型绿色荧光蛋白(EGFP)确定最佳转染剂量,并将两种质粒分别转染大鼠骨髓间充质干细胞。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹反应(Western-blot)检测破骨分化特异标志物:M-CSF、RANKL、IL-1、IL-6、TNF-α以及成骨分化特异标志物:ALP、BMP2、Runx2的mRNA表达水平和蛋白表达水平。结果:(1)流式鉴定BMSCs表面标记物CD45、CD29、CD34阳性率分别为3.8%、94%、0.3%;(2)5μL/孔LTX~?为最佳转染剂量;(3)重组过表达质粒M-CSF、RANKL经酶切证实二者均正确插入相应多克隆区域;(4)RT-PCR和Western-blot结果显示,M-CSF组:M-CSF、RANKL、IL-1、TNF-α表达增高,IL-6、ALP、BMP2、Runx2表达降低(P<0.05);RANKL组:RANKL、M-CSF、TNF-α、ALP、Runx2表达增高,IL-1、IL-6、BMP2表达降低(P<0.05)。结论:M-CSF和RANKL过表达质粒转染大鼠骨髓间充质干细胞后,均有增强BMSCs向破骨细胞分化的能力,M-CSF和RANKL对破骨细胞形成分化以及成骨分化均存在影响。
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