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近年来,海藻因其可以有效降低心血管疾病等慢性疾病的罹患风险而备受青睐,此外它还具有清除自由基能力和抑制癌细胞增殖等生物活性。血管紧张素转化酶(ACE,EC3.4.15.1)能催化机体内血管紧张素I转化成血管紧张素II,而血管紧张素II则作为一种强血管收缩剂,能迅速作用血管而引发升压效应;同时,ACE可切除舒缓激肽C-端的Phe-Arg,使其失去降血压的功能,最终导致机体血压上升。此外,由于机体内产生的氧自由基未被及时清除,将导致机体内细胞信号传导异常和DNA氧化损伤。目前,癌症也是危害人类健康较为严重的疾病,最常见的肿瘤为肝癌、结肠癌、乳腺癌及白血病等。现今,国内外研究都集中于对天然安全、无毒副作用的生物活性肽,它们具有抑制ACE活性而降低血压,清除氧自由基以减少氧化损伤和抑制癌细胞增殖等作用。红毛藻富含藻红蛋白,其含量是紫菜的4-5倍,故本研究以红毛藻为原料制备生物活性肽。本研究以红毛藻为原料,通过35-50%硫酸铵盐析及DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析技术,纯化获得高纯度的R-藻红蛋白,纯化系数A565/A280为5.1。圆二色谱测定结果表明R-藻红蛋白主要由α-螺旋结构组成。由R-藻红蛋白的圆二色谱、紫外-可见吸收光谱及荧光发射光谱检测可知,在不同p H及温度下R-藻红蛋白构象发生改变。R-藻红蛋白经体外胃肠模拟消化,所得消化产物ACE抑制活性IC50为187.0μg/m L,ABTS自由基清除能力EC50为769.9μg/m L,DPPH自由基清除能力EC50为421.9μg/m L,羟基自由基清除能力EC50为32.4μg/m L和还原力(A700=0.5)为625.8μg/m L。因此,采用胃蛋白酶和胰蛋白酶对R-藻红蛋白进行分步酶解,获得具有生物活性的藻红蛋白肽,测得分子量<2 k Da的小肽含量占89.9%。利用Sephadex-G15凝胶柱及反相高效液相色谱对该活性肽进行分离纯化,并通过测定ACE抑制活性及ABTS自由基清除率对目标肽进行跟踪,最终纯化获得2个ACE抑制肽和3个抗氧化肽。经N-端测序可知2个ACE抑制肽的氨基酸序列分别为ALLAGDPSVLEDR和VVGGTGPVDEWGIAGAR,其中ALLAGDPSVLEDR来自于R-藻红蛋白β-亚基,VVGGTGPVDEWGIAGAR来自于α-亚基。根据氨基酸序列对该活性肽进行合成,并测定ACE抑制活性及抗肿瘤活性,发现合成肽ALLAGDPSVLEDR的ACE抑制活性IC50为70.1μg/m L,而VVGGTGPVDEWGIAGAR则为65.5μg/m L。抗肿瘤细胞实验结果表明,ALLAGDPSVLEDR对癌细胞增殖具有更好地抑制作用,其对Hep G2肝癌细胞增殖的抑制作用IC50为7.89mg/m L,对SMMC 7721肝癌细胞增殖的抑制作用IC50为7.48 mg/m L,而对Caco-2结肠癌细胞增殖的抑制作用IC50为4.28 mg/m L。本研究制备的藻红蛋白蛋白肽具有多种生物活性,在功能性食品的开发利用方面具有广阔前景。