本文主要从以下三个部分展开论述：　　第一部分 针刺法建立SD大鼠椎间盘退变动物模型　　目的：针刺SD大鼠椎间盘，建立SD大鼠椎间盘退变动物模型并为下一步实验提供动物模型。方法：SD大鼠68只，选用27G穿刺针，针刺L23、L34、L45、L56椎间盘，C臂机正侧位透视确认针尖均位于椎间盘中央。针刺前及针刺后第2、第4周随机选取15只SD大鼠对针刺退变的椎间盘统一行核磁共振检查。结果：MRI示:术后2周到术后4周，针刺后椎间盘的T2W1信号持续减弱，椎间盘高度持续下降，硬脊膜受压，各组间Pfirrmann分级结果差异有统计学意义(P＜0.05)。结论：针刺法可诱导椎间盘退变，建立椎间盘退变模型，并随着时间的延长，椎间盘退变程度加重。　　第二部分 骨髓间充质干细胞的体外培养、鉴定及荧光标记　　目的：贴壁筛选法体外培养及扩增骨髓间充质干细胞(BMSCs)，并对BMSCs进行鉴定及荧光标记，为下一步实验提供种子细胞。方法：用PBS缓冲液反复冲洗SD大鼠股骨、胫骨骨髓腔至干净的培养皿内，用含FBS的DMEM/FI2培养基进行体外培养，扩增。显微镜下观察各代BMSCs生长状态，流式细胞仪鉴定细胞表面标记物CD90、CD29、CD44和CD34，并用含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的腺病毒转染使其带有EGFP基因，作荧光标记。结果：贴壁筛选法成功培养出BMSCs，且细胞生长旺盛，传到第三代活力最强，免疫表型鉴定结果CD29、CD90、CD44阳性而CD34阴性，经EGFP腺病毒转染后能发出绿色荧光。结论：分离培养的细胞生长旺盛并符合BMSCs细胞表型，经EGFP腺病毒转染后带有绿色荧光，能作为荧光标记，为下一步实验的进行提供种子细胞及细胞标记。　　第三部分 bFGF和TGF-β1复合骨髓间充质干细胞对大鼠退变椎间盘的修复作用　　目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和转化生长因子(TGF-β1)复合骨髓间充质干细胞(BMSCs)以温敏性壳聚糖(TCH)为载体对大鼠退变椎间盘的修复作用。方法：将针刺椎间盘退变4周后的SD大鼠分成四组，实验组A组使用bFGF、TGF-β1+BMSCs+TCH凝胶移植入退变的椎间盘中，B组和C组分别使用BMSCs+TCH凝胶和bFGF、TGF-β1+TCH凝胶，对照组D组使用PBS缓冲液。继续饲养4周后核磁共振观察各组椎间盘的修复情况。HE、Masson染色，组织病理学观察各组椎间盘结构。RT-PCR，Western-blot检测各组髓核蛋白聚糖(Aggrecan)、Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)、Sox-9、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)的表达。结果：移植注射的BMSCs能在椎间盘中生长，呈类髓核分化。核磁共振结果显示:A组髓核信号明显高于其他三组，B组高于C组，D组髓核信号最低，硬脊膜受压，脊髓呈串珠状改变，各组间Pfirrmann分级结果差异有统计学意义(P＜0.05)。HE，Masson染色示:A组椎间盘结构完整，髓核细胞数量优于其他三组，髓核和纤维环界限清楚，B组髓核数量多于C组，B组纤维环未见断裂，而C组可见断裂的纤维环，D组髓核细胞被杂乱的纤维组织取代。RT-PCR，Western-blot示:A组Aggrecan、CollagenⅡ、Sox-9的表达最高，B组优于C组，D组表达最低。而CollagenⅠ的表达，四组之间未见明显差异。结论：移植的BMSCs在退变椎间盘中能够存活，呈类髓核分化。bFGF、TGF-β1+BMSCs+TCH凝胶复合体对退变的椎间盘具有明显修复作用。BMSCs+TCH凝胶治疗退变椎间盘的效果优于bFGF、TGF-β1+TCH凝胶但低于bFGF、TGF-β1+BMSCs+TCH凝胶复合体。