生肌素与组蛋白的乙酰化/染色质重建

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为在染色质水平探索生肌素起动生肌过程、调节特异基因转录激活的分子机制,该工作采用生肌素真核基因表达载体(以空载体为对照)转染NIH3T3成纤维细胞、C2C12成肌细胞,利用光漂白恢复试验(FRAP0,微球菌核酸酶消化溶解试验,TAU-SDS双相(2-D)电泳及Westernblot(WB),染色质免疫沉淀(CHIP),CHIP-PCR技术等,对生肌素的调控功能与染色质重建之间的关系进行了研究.光漂白恢复试验发现,转染生肌素后,组蛋白H1在染色质中交换速率提高;微球菌核酸酶消化溶解试验表明,转染生肌素后细胞染色质在含Mg<2+>的溶液中溶解性增加.综合上述结果,强制性表达外源生肌素可使HAT活性增加,引起靶基因启动子区域核心组蛋白H3和H4发生高度超乙酰化修饰,从而引起染色质解聚,使组蛋白H1交换速率增加,Mg<2+>-溶解性增强;染色质(核小体)上述变化(染色质重建过程)增强了生肌素与靶基因启动子的亲和力,同时使转录起始所需的其它调控因子更容易被“招募”到靶基因启动子区域,促进转录起始复合物的形成,起动转录.
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