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背景特发性肺间质纤维化（idiopathic pulmonary fibrosis,IPF）是一种好发于中老年男性、原因不明的肺部疾病,以慢性、进行性的肺间质纤维化病变为主要病理表现,病变肺组织可观察到肺泡、肺间质、肺小血管、终末气道慢性炎症病变,以及在炎症迁延不愈过程中形成的纤维病变。IPF的触发及持续致病机制尚不明确,目前已有的药物仅能延缓患者肺功能下降,除肺移植外迄今为止尚无有效治疗手段,疾病预后较差,最终患者将进入呼吸衰竭,确诊IPD后患者的平均生存期仅有3～5年。探索IPF的发病机制将为其临床早期干预提供可能的靶点,对IPF的诊疗有着重要的临床价值。外泌体（exosomes）是一类磷脂膜包被囊泡,内含蛋白质、脂质、DNA、RNA等多种物质,广泛存在于多种体液中。近年来,外泌体被称为细胞间信息传递的“信使”,其通过携带的遗传物质参与了诸多疾病的发生、发展,外泌体microRNAs得到了更多关注。目前IPF患者血清外泌体microRNAs表达谱的变化及在IPF发生中的可能作用尚不明确。目的探讨IPF患者血清外泌体microRNAs表达谱的变化及其可能的临床意义。方法选择2019年1月至2021年1月就诊于新乡医学院第一附属医院呼吸内科的24例初诊IPF患者作为IPF组,另选择年龄、性别与IPF组匹配,于我院行体检的健康人群24名为对照组（normal control,NC组）,共48名受试对象纳入研究。收集入选患者的基线临床资料:年龄、性别、吸烟史等,肺功能检查结果:IPF组肺总量（total lung capacity,TLC）、第1秒用力呼气容积占预计值百分比（forced expiratory volume in one second/predict value,FEV1%pred）、一氧化碳弥散量占预计值百分比（carbon mon-oxide diffusing capacity/predict value,DLCO%pred）等。收集所有受试者清晨空腹血,通过低温高速离心法分离两组受试者血清外泌体,透射电镜对提取的外泌体进行形态鉴定。提取外泌体总RNA,经过质控后,通过高通量测序技术,检测两组外泌体microRNAs表达谱变化。使用生物信息学技术,对差异表达的microRNAs进行靶基因预测及功能分析,探索差异表达的microRNAs涉及的异常信号通路,对差异表达的microRNAs表达量与IPF患者肺功能变化趋势进行相关分析,筛选血清外泌体microRNAs表达谱异常参与IPF发生的可能机制和作用靶点。结果1.两组受试者基线资料比较:统计分析结果显示,两组受试者年龄（57.83±6.72VS 59.79±5.99岁）、性别比例（男性41.7%vs 54.2%）、吸烟史（25%vs 37.%）差异无统计学意义（P＞0.05）。IPF组肺总量TLC、FEV1%pred、DLCO%pred低于NC组（P＜0.01）。2.血清外泌体鉴定:借助透射电镜,对两组分离提取的血清外泌体进行鉴定,可看到镜下直径约100nm左右的双凹圆形囊泡结构,确定提取成分为外泌体。3.外泌体microRNAs高通量测序:经测序发现两组受试者血清外泌体mi RNAs数量、种类和表达水平不同。共有168种microRNAs在两组间差异表达。与NC组相比,IPF组有64种microRNAs表达上调,104种microRNAs表达下调。分别将两组血清外泌体内microRNAs按丰度由高到低排序,两组丰度最高的前5种microRNAs中,共有3种microRNAs涉及PI3K/Akt/m TOR信号通路,其中mi R-1-3p、mi R-99a-5p在NC组表达高于IPF组,差异具有统计学意义（P＜0.05）,NC组mi R-1b表达量高于IPF组,但差异无统计学意义（P＞0.05）。将两组间差异表达的外泌体microRNAs按照差异的显著性由高到低排序,差异最为显著的前5种microRNAs分别为:mi R-672-5p,涉及肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）信号通路;mi R-466b-3p,涉及炎症介质对瞬时受体电位（transient receptor potential,TRP）的调控;mi R-204-5p,涉及磷脂酰肌醇信号系统;mi R-215,涉及核黄素代谢;mi R-411-5p,涉及m TOR信号通路。4.3种涉及PI3K/Akt/m TOR信号通路且在两组间差异表达的micro RNA:mi RNAs mi R-1-3p、mi R-99a-5p、mi R-411-5p与IPF患者DLCO%pred呈正相关（P＜0.05）,其中mi R-99a-5p与DLCO%pred的相关系数r为0.6172,mi R-1-3p与DLCO%pred的相关系数r为0.5748,mi R-411-5p与IPF患者DLCO%pred的相关系数r为0.825。5.通过RT-q PCR方法对两组间差异表达的3种血清外泌体microRNAs分子mi RNAs mi R-1-3p、mi R-99a-5p、mi R-411-5p含量进行检测,验证高通量测序结果。RT-q PCR结果提示3种microRNAs表达差异与高通量测序结果一致,均表现为在NC组升高,IPF组降低结论IPF患者血清外泌体microRNAs表达谱与健康受试者相比发生变化,异常表达的外泌体microRNAs可能通过活化PI3K/Akt/m TOR信号通路参与了IPF进展。