【摘 要】
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生物体的细胞时刻受到来自内源及外源环境中各种DNA损伤因子的影响。DNA代谢过程中的损伤如不能得到修复则会导致遗传信息的永久性改变。为了维持基因组的稳定性,细胞周期检验
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生物体的细胞时刻受到来自内源及外源环境中各种DNA损伤因子的影响。DNA代谢过程中的损伤如不能得到修复则会导致遗传信息的永久性改变。为了维持基因组的稳定性,细胞周期检验点以及多种DNA损伤修复机制会被激活并协同作用,涉及到的损伤修复蛋白和信号分子会被招募到染色体上的损伤位点发挥功能。利用定量蛋白质组学技术能够精确比较药物处理前后染色质结合蛋白中相同肽段的丰度变化。 为了发现可能参与DNA损伤反应的蛋白新分子,我们用可导致链间交联的试剂丝裂霉素C处理HeLa细胞,然后用iTRAQ定量蛋白质组学技术比较不同修复时间点的蛋白富集情况。通过对蛋白质组学数据的深入分析和挖掘,我们鉴定到397个被认为在损伤处理前后具有显著变化的蛋白,其中包含许多目前已知的参与DNA损伤修复的经典蛋白。经过GO功能分析等筛选方法,我们最终发现甲基化结合蛋白MBD2参与DNA损伤反应的新功能,并证实它能够被招募到显微激光辐射后引起的DNA损伤位点。我们进一步研究了MBD2在损伤位点的招募机制,发现它的招募受到自身MBD功能结构域和C端区域的调节,并且依赖于多聚(ADP-核糖)聚合酶和染色质解旋酶DNA结合蛋白CHD4。此外,利用CRISPR-Cas9技术构建的稳定细胞系证实敲低MBD2能够增加哺乳动物细胞对MMC的敏感性。
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