布鲁菌病是由布鲁菌导致的一种古老的人畜共患病,引起多系统临床症状,对人畜健康、国际贸易都构成严重威胁。现行诊断标准中布鲁菌检测手段为SAT、RBPT等传统血清免疫学检测,操作方便,检测快速,但结果依赖实验者主观判定,且与多种常见细菌存在交叉反应。快速、特异、准确的诊断方法是提高临床确诊速度的关键。本研究初步建立了布鲁菌侧流免疫层析和二重荧光定量PCR检测方法,操作简单,可应用于人布鲁菌病在基层和田间的诊断和筛查。本研究针对布鲁菌病常见致病毒力因子OMP10、OMP19、OMP25、OMP31、BCSP31等目标片段,设计并筛选了特异性引物,最后选择以BCSP31蛋白基因为目标序列的第16号引物,正、反向引物5’端分别连接生物素和地高辛作为侧流免疫层析上游的常规PCR反应引物。调整了针对该引物的最适浓度（10nM）和退火温度（55℃）,及反应体系:premix PCR buffer 25μ1、正反向引物各2.5μl、DNA模板5μl、DEPC水补至50μl。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,对胶体金标记抗体的用量、封闭液、样品垫和结合垫材料的选择和预处理、样品缓冲液等条件进行优化后,组装检测体系。以模板DNA梯度稀释后进行PCR扩增产物作为模拟阳性样品进行灵敏度测定实验;以阴性参考菌DNA为模板的扩增产物进行特异性实验;组装不同批次试纸条,测试该体系的稳定性。本体系的检出下限为10-2ng/μl,与肠伤寒沙门氏菌、大肠杆菌、变形杆菌等无交叉反应,重复性较好,在37℃下进行24h及72h加速实验,体系稳定。本研究第二部分根据实验一中的引物筛选结果,通过对比Ct值、扩增及熔解曲线等初筛4对引物,分别针对IS711、16SrRNA、OMP25、BCSP31;对这4对引物分别构建重组质粒,稀释浓度梯度为标准品制作标准曲线。通过对比各组引物扩增目的基因的斜率与理论值及扩增效率,选择2对引物（IS711、OMP25）作为二重荧光定量PCR的引物组合。对2对引物不同浓度及比例、所用模板DNA不同用量和比例以及体系进行调整和优化,得出二重反应的最适体系。将2对引物的标准品按同一稀释度组合后制作标准曲线,斜率与理论值接近,扩增效率良好。将重组质粒稀释一定梯度进行二重体系的灵敏性实验;以阴性参考菌DNA为模板进行特异性实验;本体系检出下限为10个拷贝,与肠伤寒沙门氏菌、大肠杆菌、变形杆菌等无交叉反应,重复性较好,体系稳定。本研究初步建立了针对布鲁菌病检测的2种方法,核酸侧流免疫层析法操作简便,方便快捷,判读清楚,可适用于基层检测,加快诊断速度;二重荧光定量PCR方法构建了标准曲线,可对样品中的核酸载量进行相对定量,同时提高了检出率。