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目的观察玻璃体腔注射血管内皮生长因子-A(vascular endothelial growthfactor-A,VEGF-A)后不同时间大鼠视网膜表达转化生长因子-β1(transforminggrowth factor,TGF-β1)和结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的变化情况,探讨二者在视网膜新生血管性疾病发病机制中的作用,为视网膜新生血管性疾病的临床防治提供基础理论依据。方法1.Wistar大鼠共33只,鼠龄12-14周,体重约250g,雌雄不限,均经裂隙灯、检眼镜检查排除眼部疾病。随机选择24只作为处理组,剩余9只作为空白对照组(C组),并随机分为3个亚组。处理组右眼玻璃体腔注射含有100ng VEGF-A的0.1%BSA的PBS溶液3μl(A组),左眼玻璃体腔注射0.1%BSA的PBS溶液3μl(B组),C组不给任何处理,注射时发生玻璃体出血的眼不纳入本研究。处理组分别在注射后24、48、72小时(即A1-A3组、B1-B3组),选取相应空白对照组亚组(即C1-C3组)行10%水合氯醛腹腔注射麻醉。2.摘除眼球,平行于视神经连续冰冻切片,HE染色,光镜下观察视网膜形态学变化,免疫组化SABC法观察视网膜各层阳性染色情况。每只眼球选取2张结构完整的视网膜切片,每张切片随机选取5个视野(×200倍),Image-Pro Plus 6.0图像处理分析软件分析各组染色阳性区的平均累积光密度(integrated opticdensity,IOD)。3.运用SPSS11.5统计软件,对不同处理组和空白对照组及不同时间点数据采用采用单因素方差分析,并用SNK检验及Post Hoc的Tamhane’s T2进行组间比较,双侧检验,P<0.05差异具有统计学意义。结果1.HE染色A1组、B组和C组视网膜层次结构整齐分明,光感受器细胞内外节形态规整,内、外核层细胞核染色深紫,染色均匀,RPE细胞核呈淡紫色,扁椭圆形,边界清晰,染色均匀。随着时间的推移,视网膜结构和变化不明显。A2组视网膜厚度增加,神经节细胞肿胀,光感受器细胞内外节形态欠规整,结构欠清,RPE细胞肿胀变圆,但数量变化不明显。A3较A2组变化不明显。2.免疫组织化学染色C组CTGF免疫组化染色阳性部位主要在神经节细胞层(GCL)和内丛状层(IPL),为弱阳性。B组呈现轻度的全视网膜染色的增加,A组在GCL层表现为更强的CTGF染色。TGF-β1染色仅在视网膜血管结构观察到。TGF-β1染色在B组略有增强,A组与C组比较明显增强。A组各亚组间CTGF表达阳性区的平均IOD差异有统计学意义(F=41.361,P=0.000),进一步用SNK法进行组间比较,各亚组间差异均有统计学意义(P<0.05);B组不同时间CTGF表达阳性区的平均IOD差异也有统计学意义(F=25.284,P=0.000),进一步行SNK法检验,B1与B2、B2与B3组间差异均具有统计学意义(P<0.05)。C组不同时间CTGF表达阳性区平均IOD差异无统计学意义(F=0.002,P=0.998)。A组各亚组间TGF-β1表达阳性区的平均IOD差异有统计学意义(F=26.783,P=0.000),进一步用SNK法进行组间比较,各亚组间差异均有统计学意义(P<0.05)。B组不同时间TGF-β1表达阳性区的平均IOD差异也有统计学意义(F=27.644,P=0.000),进一步行Post Hoc的Tamhane’s T2法进行组间比较,B1与B2、B2与B3组间差异均具有统计学意义(P<0.05).C组不同时间TGF-β1表达阳性区平均IOD差异无统计学意义(F=1.308,P=0.300)。不同处理后24小时,A1、B1、C1组CTGF及TGF-β1阳性区平均IOD差异无统计学意义(F1=3.482,P1=0.053;F2=0.604,P2=0.558),尚可认为玻璃体腔注射VEGF-A后24小时尚未引起明显CTGF及TGF-β1表达增高。注射后48小时,2种因子的表达达高峰,72小时时较48小时下降。A2、B2、C2及A3、B3、C3组CTGF及TGF-β1阳性区平均IOD差异均有统计学意义(P<0.05),SNK法各组间比较,CTGF及TGF-β1各组间均有统计学意义(P<0.05)。结论本实验采用玻璃体腔注射的方法,研究外源性VEGF-A对大鼠视网膜表达CTGF和TGF-β1的影响,并通过免疫组织化学染色方法观察TGF-β1及CTGF表达情况,发现外源性VEGF-A能诱导TGF-β1及CTGF的表达增加,注射后48小时达高峰,推测VEGF可能通过上调CTGF等促纤维化生长因子使视网膜基底膜增厚而参与视网膜新生血管性疾病的发生与发展。