目的:阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种与年龄关系密切的神经退行性疾病,临床上主要表现为记忆障碍、认知障碍及语言功能障碍,甚至表现为人格及行为异常,使得患者的生活质量急剧下降,对其本人及家庭造成极大的困扰。因此寻找一种有效的治疗AD的手段迫在眉睫。对于AD患者脑PET显像的研究发现,AD患者脑部额叶及颞叶的葡萄糖代谢率明显降低,而给予针刺治疗后,葡萄糖代谢率增加。因此我们认为针刺是治疗老年痴呆的一种有效手段,且其机理可能与改变脑部血流量及葡萄糖代谢有关。目前,对于AD的机理研究主要有Aβ沉积与Tau蛋白学说,还有一些学者则提出了线粒体级联假说,认为线粒体损伤与AD的发病关系密切。目前对于线粒体的研究主要是功能及形态结构方面的研究。对于线粒体功能方面前人已经有很多研究了,而对于线粒体形态学方面的研究目前比较热门。最近的研究报道认为:线粒体分裂与融合即线粒体动力学的异常可以导致帕金森病、阿尔茨海默病、亨廷顿病等神经退行性疾病。而线粒体分裂与融合平衡状态的保持对于保证神经元末梢长距离运输和能量平均分布是至关重要的。在高能量需求区域内,线粒体融合分裂的动态过程与突触和树突棘的形成密切相关。当线粒体分裂过程占主导地位时,可以增加突触的形成;而当线粒体融合占优势时,则导致树突棘中线粒体数量和突触形成的减少。当线粒体融合分裂异常则会使线粒体在神经元中的运输受阻,线粒体的能量代谢率降低,从而使活性氧(reactive oxygen species,ROS)增加,而这些变化又可以反过来作用于细胞通路,打乱细胞的信号通路,从而导致神经元突触的功能减弱甚至引起神经元细胞死亡。因此本研究从线粒体动力学出发,选取了线粒体的分裂蛋白Drp1、融合蛋白OPA1以及基质蛋白Cypd三个指标,观察针刺四关穴对AD模型大鼠额叶线粒体中这些蛋白的影响,探讨AD的可能发病机制及针刺四关穴治疗AD的疗效与可能作用机制。方法:将60只2月龄SD雄性大鼠按照随机数字表分为空白组、假手术组、模型组、安理申组及针刺组,每组12只。模型组、安理申组及针刺组采用双侧侧脑室注射STZ的方法构建AD模型;假手术组则侧脑室注射柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液。空白组、假手术组及模型组只常规喂养不做任何处置;针刺组取双侧“合谷”、“太冲”穴,直刺2-3mm,留针15min,间隔5min行针一次,平补平泻法,频率为120-150次/min,捻转角度为90°-180°,治疗6天为一个疗程,中间休息1天,共4个疗程。安理申组则用盐酸多奈哌齐混悬液进行灌胃治疗,给药量为0.45 mg/kg,干预疗程同针刺组。干预结束后,对大鼠进行Morris水迷宫检测,比较不同干预措施对大鼠行为学的影响;采用定量RT-q PCR法检测大鼠额叶线粒体中Drp1、OPA1以及Cyp D的基因表达水平并用Western Blot法检测大脑额叶组织中Drp1、OPA1及Cyp D蛋白的表达。观察针刺四关穴对这些蛋白表达的影响。结果:1.Morris水迷宫实验:1.1定位航行实验:逃避潜伏期:随着训练时间的延长,大鼠的逃避潜伏期越来越短。与空白组及假手术组相比,模型组大鼠的逃避潜伏期明显延长(P<0.01),空白组及假手术组之间无明显差异。安理申组及针刺组大鼠的逃避潜伏期则比模型组的明显缩短(P<0.01),但安理申组与针刺组两者之间无明显差异。1.2空间探索实验:模型组大鼠穿越平台的次数比空白组及假手术组的大鼠明显减少(P<0.01),而安理申组及针刺组的大鼠穿越平台的次数要多于模型组(P<0.01)。安理申组与针刺组之间则无明显差异。2.Western-Blot检测:2.1模型组与其他四组比较,Drp1及Cypd的蛋白表达增加,但无统计学差异。安理申组及针刺组的Drp1与Cypd的蛋白表达量减少,但也无统计学意义。2.2模型组及假手术组OPA1的蛋白表达量比空白组减少,而安理申组及针刺组的OPA1蛋白表达量较空白组稍高,但彼此之间均无统计学差异。3.RT-q PCR检测:3.1模型组与其他四组相比,Drp1与Cypd的表达量均增加,差异有统计学意义(P<0.001)。但安理申组及针刺组的Drp1表达量高于假手术组(P<0.001),而这两组Cypd的表达量则小于假手术组,且针刺组的减少量多于安理申组(P<0.001)。3.2 OPA1:模型组与其他组比较,OPA1的表达量均减少,统计有显著性差异(P<0.001),相比,针刺组及对照组的表达量均比假手术组增加(P<0.001),而针刺组的增加量要大于对照组(P<0.001)。结论:针刺四关穴可以明显缩短AD大鼠的逃避潜伏期,使得AD大鼠在空间探索实验中穿越平台的次数增多,提示针刺四关穴可以改善AD模型大鼠的学习记忆能力。同时针刺四关穴可以明显下调Drp1、Cypd的表达量,升高OPA1的表达量,提示针刺四关穴可以改善额叶线粒体中分裂与融合的失衡。