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目的：贲门腺癌(gastric cardia adenocarcinoma, GCA)是我国北方较为常见的恶性肿瘤之一。近年在我国，贲门癌的发病率总体呈上升趋势，而且其起病隐匿，有症状来就诊时多数已到中晚期。然而迄今为止，贲门腺癌的发病机制尚不明确。DNA甲基化作为表遗传学研究的重要内容，在肿瘤发生发展中的作用越来越受到研究界的重视。本课题通过研究胰岛素样生长因子结合蛋白7(insulin-like growth factor binding protein7, IGFBP7)基因在贲门腺癌及癌旁正常组织中其启动子区和第1外显子区的甲基化状态以及它们与IGFBP7蛋白表达之间的关系，探讨IGFBP7基因甲基化与贲门腺癌的发生、发展的关系，预期为贲门腺癌发病的分子生物学机制、生物治疗方案及其预测预后等方面提供新的思路。方法：1应用甲基化特异性PCR(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)技术检测85例贲门腺癌组织，67例癌旁非肿瘤组织中IGFBP7基因的甲基化状态。2应用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chainreaction, RT-PCR)法检测56例贲门腺癌组织和30例癌旁非肿瘤组织中IGFBP7基因的mRNA表达情况。3应用免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)PV法检测56例贲门腺癌组织及30例相应癌旁非肿瘤组织中IGFBP7蛋白的表达情况。4运用统计软件SPSS13.0对数据进行统计学分析。结果：1IGFBP7基因甲基化状态及其与临床病理资料之间的关系1.1IGFBP7基因启动子区甲基化状况分析IGFBP7基因启动子区在贲门腺癌组和癌旁非肿瘤组织的甲基化率分别为52.9%(45/85)和35.8%(24/67)，贲门腺癌组织中IGFBP7基因启动子区甲基化率显著高于癌旁正常组织(χ2=4.430, P=0.035)。中低分化腺癌组IGFBP7基因启动子区甲基化发生率60.9%(39/64)显著高于高分化腺癌组甲基化发生率33.3%(7/21)(P<0.05)；IGFBP7基因启动子区在有淋巴结转移组的甲基化发生率63.5%(33/52)显著高于无淋巴结转移组的甲基化发生率36.4%(12/33)(P<0.05)；IGFBP7基因启动子区甲基化率与肿瘤组织浸润深度、年龄和性别无关(P>0.05)。1.2IGFBP7基因第1外显子区甲基化状况分析IGFBP7基因第1外显子区在贲门腺癌和癌旁非肿瘤组织的甲基化率分别为35.3%(30/85)和19.4%(13/67)，贲门腺癌组的甲基化率显著高于癌旁正常组(P<0.05)；IGFBP7基因第1外显子区甲基化发生率与肿瘤组织的分化程度、淋巴结转移情况、浸润深度、年龄和性别等均无关(P>0.05)。1.3IGFBP7基因启动子区和第1外显子区共同甲基化分析26例贲门腺癌组织中IGFBP7基因启动子区和第1外显子区同时发生甲基化，13例癌旁非肿瘤组织中两位点同时发生甲基化，差异无统计学意义(P>0.05)。IGFBP7基因启动子区甲基化率显著高于其第1外显子区甲基化率(P<0.05)。贲门腺癌组织中IGFBP7基因的两个位点甲基化同时发生率与患者的淋巴结转移情况及病理分级无关(P>0.05)。2IGFBP7基因mRNA的表达情况IGFBP7基因mRNA在贲门腺癌和癌旁非肿瘤组织的表达量分别为0.50±0.33和0.90±0.29，贲门腺癌组织mRNA的表达量明显低于癌旁正常组织，两者的差异有统计学意义(t=-3.759, P=0.001)。在贲门腺癌患者中，IGFBP7的mRNA表达与患者的淋巴结转移情况及肿瘤组织的分化程度有关(P<0.05)。3IGFBP7蛋白的表达情况在56例贲门腺癌组织和30例癌旁非肿瘤组织中，对IGFBP7蛋白进行检测，两组的蛋白表达率分别为26.8%(15/56)和80.0%(24/30)，贲门腺癌组织中IGFBP7蛋白表达显著低于癌旁正常组织，二者差异具有统计学意义(P<0.05)。在贲门腺癌中，高分化组IGFBP7蛋白表达高于中低分化组(χ~2=10.957, P=0.001)，而与淋巴结转移情况无关(P>0.05)。4IGFBP7基因甲基化与其mRNA和蛋白表达的关系4.1IGFBP7基因启动子区甲基化与其mRNA和蛋白表达的关系在IGFBP7基因启动子区甲基化阳性的贲门腺癌组织中，其mRNA相对表达量平均为0.27±0.06，甲基化阴性的贲门腺癌组织中mRNA相对表达量平均为0.80±0.28，两者差异有统计学意义(P<0.05)。发生IGFBP7基因启动子区高甲基化贲门腺癌组织中IGFBP7蛋白表达率为10%(3/30)，IGFBP7基因启动子区甲基化阴性组的IGFBP7蛋白表达阳性率为57.1%(12/21)，二者差异有统计学意义(P<0.05)，IGFBP7基因启动子区甲基化与其蛋白表达之间呈明显负相关(R=-0.509, P<0.05)。4.2IGFBP7基因第1外显子区甲基化与其mRNA和蛋白表达的关系在IGFBP7基因第1外显子区甲基化阳性的贲门腺癌组织中，其mRNA相对表达量平均为0.43±0.29，甲基化阴性的贲门腺癌组织中mRNA相对表达量平均为0.53±0.35，两者的差异无统计学意义(P>0.05)。发生IGFBP7基因第1外显子区甲基化贲门腺癌组织中IGFBP7蛋白表达率为23.3%(7/30)，IGFBP7基因第1外显子区甲基化阴性组的IGFBP7蛋白表达阳性率为44.4%（8/18)，两组间差异无统计学意义(P>0.05)，亦无明显相关性(R=-0.220, P>0.05)。结论：1在贲门腺癌的发生过程中IGFBP7基因启动子区比第1外显子的5’非翻译区更易发生高甲基化而使基因表达下调。2IGFBP7基因启动子区甲基化可能是导致贲门腺癌形成的原因之一。3IGFBP7启动子区甲基化情况与患者年龄，性别，侵及范围等因素无关，与分化程度及淋巴结转移等生物学行为有关，提示IGFBP7启动子区甲基化可能与贲门腺癌的预后有关。4IGFBP7蛋白表达降低可能与贲门腺癌发生有关，且IGFBP7基因启动子区高甲基化可能是贲门腺癌中IGFBP7蛋白低表达的原因之一。