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研究背景及目的:胃癌是我国发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一,其确切的发病机制目前仍不十分清楚。恶性肿瘤发生和演进是一个复杂过程,了解该过程的生物学基础并探索有关诊断及预后的生物学标记均需要对成百上千例肿瘤进行大样本研究。组织芯片又称组织微阵列,是将数十个、数百个乃至上千个小的组织片整齐地排列在某一载体上(通常是载玻片)而成的微缩组织切片,可同时研究大量组织以及不同因子的表达。RNA干扰是一种双链RNA诱导的基因沉默现象,在该现象中Argonaute蛋白作为一个高度保守的家族与多种生物的RNA干扰密切相关,是组成RNA诱导的沉默复合体(RISC)的核心元件。Argonaute蛋白选择性地与miRNA(microRNA)或siRNA结合,其PIWI盒子与Dicer的RNaseⅢ结构域直接相互作用,PIWI与Dicer之间的相互作用可能会促进miRNA/siRNA的释放。目前有研究表明miRNA与多种肿瘤的发生存在着密切关系,miRNA既可作为抑癌基因,下调原癌基因的活性;也可作为癌基因,下调抑癌基因的活性。Argonaute蛋白选择性地与miRNA和siRNA结合,并影响其表达,因此Argonaute蛋白极可能与肿瘤的发生有关。本研究将制备胃癌组织芯片,利用其高通量优势,检测胃癌组织中microRNA相关蛋白——Argonaute家族系列蛋白表达情况,研究其表达特点,分析与胃癌肿瘤发生、发展的关系。对象与方法:1、材料:200例胃腺癌组织标本和100例胃炎症黏膜组织取自生物芯片上海国家工程研究中心组织库国家863项目协作医院新鲜手术切除标本及存档标本,全部病例术前均未作化疗或放疗。胃腺癌患者中男性132例,女性68例,年龄28～81岁。胃炎症黏膜患者中男性68例,女性32例,年龄24～71岁。所有组织标本用10%中性甲醛溶液固定,常规脱水、石蜡包埋备用。2、试剂:Argonautel、Argonaute2,Argonaute3和Argonaute4单克隆抗体均购自上海芯超生物科技有限公司。Piwil1、Piwil2、Piwil3和Piwil4单克隆抗体均购自上海芯超生物科技有限公司。3、组织芯片制备:组织芯片由生物芯片上海国家工程研究中心制备。首先对每一个供体蜡块进行切片和HE染色。显微镜下对所需穿取的目标组织进行定位,选取癌、炎症黏膜共计300个位点,并利用组织芯片制作仪(BeecherInstruments.Inc)制成组织芯片,以5um的厚度连续切片,所得的组织芯片的每个点都经过病理诊断。4、观察指标:采用二步法进行免疫组化染色,检测胃癌组织和胃炎症黏膜组织中人类Argonaute家族蛋白——Argonaute亚家族(Argonautel、Argonaute2、Argonaute3、Argonaute4)及PIWI亚家族(Piwil1、Piwil2、Piwil3、Piwil4)表达情况。所有8个蛋白阳性染色均为细胞质呈黄色或棕黄色,观察5个以上高倍视野,计数不少于1000个细胞中的阳性细胞数。取阳性细胞百分比的平均值(阳性积分)为结果并统计。5、统计学处理:采用PEMS3.1统计软件进行统计分析。不同组织间Argonaute1、Argonaute2、Argonaute3、Argonaute4、Piwil1、Piwil2、Piwil3、Piwil4蛋白表达相关采用多样本比较及两两比较的秩和检验,蛋白表达阳性率两两比较采用wilcoxon秩和检验。结果:1、Argonaute亚家族蛋白表达:胃癌组织中Argonaute1、Argonaute2、Argonaute3和Argonaute4蛋白表达明显高于胃炎症黏膜组织,差异具有显著性(均P＜0.05)。在胃癌组织中Argonaute1、Argonaute2、Argonaute3和Argonaute4蛋白两两间表达均存在相关性(P＜0.01)。2、Argonaute亚家族蛋白表达与胃癌临床分期关系:胃癌组织(Ⅰ-Ⅱ期)中Argonaute1、Argonaute2,Argonaute3和Argonaute4蛋白表达明显高于胃炎症黏膜组织(P＜0.05)。Argonaute2、Argonaute3,Argonaute4蛋白在胃癌(Ⅰ-Ⅱ期)和胃癌(Ⅲ-Ⅳ期)中的表达差异有显著性(P＜0.05);Argonaute1蛋白在在胃癌(Ⅰ-Ⅱ期)和胃癌(Ⅲ-Ⅳ期)中的表达差异无显著性(P＞0.05)。3、PIWI亚家族蛋白表达:胃癌组织中Piwil1蛋白表达高于胃炎症黏膜组织(P＜0.05);Piwil2、Piwil3和Piwil4在胃癌组织和胃炎症组织中的表达差异无显著(P＞0.05)。4、PIWI亚家族蛋白表达与胃癌临床分期关系:Piwil1蛋白在胃炎症黏膜组织和胃癌(Ⅰ-Ⅱ期)中表达差异有显著性(P＜0.05);Piwil1蛋白在胃癌(Ⅰ-Ⅱ期)和胃癌(Ⅲ-Ⅳ期)中表达差异无显著性(P＞0.05)。结论:1、胃癌的发生与Argonaute1、Argonaute2,Argonaute3和Argonaute4蛋白过表达可能有关。2、胃癌的发展与Argonaute2,Argonaute3和Argonaute4蛋白过表达可能有关。3、胃癌的发生与Piwil1蛋白过表达可能有关。