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1背景前列腺癌是50岁以上男性最常见的癌症,是世界上第二大男性癌症死亡原因。前列腺癌最初依赖雄激素,对雄激素剥夺治疗敏感。然而,肿瘤在两年内对雄激素缺乏不敏感。因此,前列腺癌可以缓慢发展到高风险攻击阶段。前列腺患者的药物治疗包括雄激素生物合成抑制剂、化疗和免疫治疗。但仍不能完全抑制前列腺癌进展。因此,迫切需要鉴定和开发抗前列腺癌的新药物。自噬是一种对健康和疾病很重要的稳态过程。自噬作为细胞的循环系统,通过将细胞材料运送到溶酶体进行降解,特别是受损的细胞内蛋白质和细胞器,随后再利用组成大分子进行其他生物过程。调节自噬的机制与细胞死亡机制密切互动,允许这些过程之间存在显著的动态相互作用。因此在肿瘤细胞中研究凋亡和自噬的机制及相关作用关系,以及进一步探究影响凋亡和自噬的共同信号通路,对于肿瘤的药物治疗具有积极的意义。自然提取物来源于植物、动物、微生物等,多年来被广泛应用于传统医药中。中草药是自然提取物的主要种类之一,中国使用中草药治疗疾病具有几千年的历史,是祖国医学的重要组成部分。中草药被认为是发现包括抗癌药物在内的现代药物的新先导化合物的重要来源。毛萼乙素（Eriocalyxin B,EriB）是一种从植物中分离得到的二萜,具有抗肿瘤特性。EriB提取于疏花毛萼香茶菜。疏花毛萼香茶菜是唇形科草本植物,分布于我国西南地区,作为抗炎药物使用了很长时间。近期的研究表明,EriB具有针对多种肿瘤细胞的抗肿瘤效果。然而,很少有系统地研究EriB在前列腺癌细胞中抗肿瘤活性的机制。本研究的目的是探讨EriB对前列腺癌细胞的影响及机制。2目的探究毛萼乙素能否通过调控凋亡和自噬效果抑制前列腺癌细胞的生长,并进一步证实在这一过程中凋亡和自噬的相互作用关系,同时深入研究毛萼乙素作用于前列腺癌细胞中影响凋亡和自噬的信号通路、分子机制。为毛萼乙素治疗前列腺癌的机制研究提供基础实验理论依据。3材料方法在本研究中,使用人前列腺癌细胞系PC-3细胞和22Rv1细胞,它们分别属于雄激素非依赖性和雄激素依赖性前列腺癌细胞。3.1使用不同浓度的毛萼乙素加入人前列腺癌细胞培养液中,联合毛萼乙素和自噬抑制剂或活性氧（Reactive oxygen species,ROS）抑制剂加入前列腺癌细胞培养液。3.2前列腺癌细胞活性使用MTT法测定。3.3 AnnexinV-FITC/PI双染处理前列腺癌细胞,并用流式细胞仪检测凋亡细胞分布和细胞周期。3.4荧光显微镜用于捕获前列腺癌细胞中自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ。3.5使用电镜观察前列腺癌细胞中的自噬泡变化。3.6用Western blot检测前列腺癌细胞种类凋亡相关蛋白caspase 3和PARP,自噬相关蛋白LC3B-Ⅰ、LC3B-Ⅱ,信号通路蛋白Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR。4结果4.1毛萼乙素对人前列腺癌细胞生长的影响情况毛萼乙素对人前列腺癌细胞的生长具有抑制作用,具有时间和剂量依赖性特点。4.2毛萼乙素对人前列腺癌细胞凋亡的影响情况毛萼乙素能够诱导人前列腺癌细胞凋亡细胞升高,毛萼乙素能够诱导人前列腺癌细胞中凋亡相关蛋白升高。4.3毛萼乙素对人前列腺癌细胞细胞周期的影响情况毛萼乙素不能诱导人前列腺癌细胞的细胞周期阻滞。4.4毛萼乙素对人前列腺癌细胞自噬的影响情况毛萼乙素能够诱导人前列腺癌细胞自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ升高,通过不同阶段的自噬抑制对LC3B-Ⅱ蛋白的影响及电镜观察到的自噬泡变化,明确毛萼乙素能够在人前列腺癌细胞中诱导自噬。4.5毛萼乙素诱导人前列腺癌细胞中凋亡和自噬的相互作用关系通过在毛萼乙素处理的人前列腺癌细胞培养液中加入自噬抑制剂绿奎（Chloroquine,CQ）,发现自噬抑制剂联合毛萼乙素能够进一步增加人前列腺癌细胞的凋亡细胞数量和凋亡相关蛋白表达。4.6毛萼乙素对影响凋亡和自噬共同信号通路的影响情况。通过检测毛萼乙素处理后人前列腺癌细胞中凋亡和自噬共同信号通路Akt/mTOR蛋白的检测,发现毛萼乙素导致p-Akt、p-mTOR水平降低,表明能够抑制人前列腺癌细胞中Akt/mTOR信号通路。4.7 ROS抑制剂N-乙酰半胱氨酸（N-acetyl-L-cysteine,NAC）对EriB处理后的前列腺癌细胞生长情况影响。NAC能够阻断EriB对前列腺癌细胞的生长抑制作用。4.8 ROS抑制剂NAC对EriB处理后的前列腺癌细胞凋亡情况影响。NAC能够抑制EriB诱导前列腺癌细胞凋亡作用。4.9 ROS抑制剂NAC对EriB处理后的前列腺癌细胞自噬蛋白表达影响。NAC能够抑制EriB诱导前列腺癌细胞内LC3B-Ⅱ升高表达。4.10 ROS抑制剂NAC对EriB处理后的前列腺癌细胞内Akt/mTOR信号通路影响。NAC能够阻断EriB对前列腺癌细胞内Akt/mTOR表达抑制5结论5.1毛萼乙素有效抑制人前列腺癌细胞生长。5.2毛萼乙素在人前列腺癌细胞中诱导凋亡效果。5.3毛萼乙素不能诱导人前列腺癌细胞中细胞周期的变化。5.4毛萼乙素在人前列腺癌细胞中诱导自噬效果。5.5毛萼乙素诱导的自噬效果具有细胞保护作用。5.6毛萼乙素通过抑制Akt/mTOR通路,在人前列腺癌细胞中诱导凋亡后自噬。5.7 EriB通过诱导ROS水平升高抑制Akt/mTOR信号通路。