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目的：利用基因工程方法,建立巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统对人源泛素结合酶UBC13(ubiquitin-conjugating enzyme UBC13)进行表达,旨在获得具有生物活性的UBC13,为进一步研究UBC13的作用机制和临床应用提供理论基础和技术路径。方法：根据巴斯德毕赤酵母对密码子偏好性,对UBC13基因进行密码子优化并添加限制性酶切位点Xhol(GAA TTC)、EcoRI(CTC GAG)限制性酶切位点和6 × His标签(CAC CAC CAC CAC CAC CAC),人工合成UBC13新基因；通过DNA重组技术构建了UBC13的重组表达质粒pwPICZalpha-UBC13;采用电转化的方法将线性化的重组质粒pwPICZalpha-UBC13导入毕赤酵母中,用含0.1%Zeocin的YPD平板筛选重组子；任意挑取6个重组子菌落进行诱导培养,用SDS-PAGE实验验证；合成特异性引物UBC13-F、R对重组子的DNA、cDNA进行PCR鉴定并测序；利用anti-UBC13抗体对重组蛋白进行Western blot分析验证；大量诱导UBC13蛋白表达,经过Ni-NTA Resin柱、透析、阴离子柱、浓缩等步骤,获得高浓度、高纯度的UBC13蛋白,并利用SDS-PAGE实验验证纯化过程,BCA法测定最终蛋白浓度；对表达蛋白进行还原性和非还原性处理,SDS-PAGE实验验证通过二硫键形成的UBC13二聚体。结果：1、双酶切结果显示获得了所需的UBC13基因片段；2、双酶切结果证明重组质粒pwPICZalpha-UBC13构建成功；3、SDS-PAGE实验初步证明重组酵母构建成功；4、转化子DNA、cDNA的PCR实验证明重组酵母构建成功；5、Western blot证明了表达的蛋白是重组蛋白UBC13,且具有一定的生物学活性；6、SDS-PAGE实验显示了纯化过程中UBC13蛋白的纯化效果,BCA法测定浓缩后的蛋白浓度为1.2mg/ml;7、表达的蛋白中含有通过二硫键形成的UBC13二聚体。结论：成功构建了UBC13的真核表达系统,获得了具有遗传稳定性且能够表达具有生物活性UBC13的重组毕赤酵母菌株。