论文部分内容阅读
目的:基于云南省名中医的临床经验方剂益肺散结方(又称益肺逐瘀方)对缓解气道炎症,改善COPD气道重塑有良好效果,本实验进一步研究该方中逐瘀药物莪术、三七的主成份莪术醇、姜黄素、三七总皂苷对巨噬细胞的作用,探讨其三种活性成分是否通过抑制NF-κB信号通路来下调炎症因子缓解炎症损伤,以及检测纤维化TGF-β/Smads信号通路相关指标,探索在细胞损伤模型中三种活性成分作用于两条信号通路的关系。方法:采用香烟提取物(Cigarette smoke extract,CSE)刺激细胞的方法,建立巨噬细胞Raw264.7细胞炎症损伤模型。给予莪术醇、姜黄素、三七总皂苷三组药物干预,用MTT法和凋亡检测来筛选适合的给药浓度,用DCF法检测活性氧(Reactive oxygen species,ROS)荧光表达水平,通过实时荧光定量PCR检测炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β和致纤维化因子α-SMA、Smad2/3、TGF-β的mRNA表达量,Western blot检测P-NF-κB p65、P-Smad2/3的蛋白磷酸化水平。结果:1、CSE刺激巨噬细胞Raw264.7后,与正常组相比模型组荧光亮度增强,产生大量ROS。与模型组相比给药组的荧光亮度则有不同程度上的减弱,减少了ROS释放量,其中莪术醇组降低作用最为明显,P<0.05,有统计学意义。2、姜黄素、莪术醇、三七总皂苷可以降低NF-κB p65蛋白磷酸化水平表达,以及下调炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA表达水平,其中姜黄素组下调效果明显,P<0.05,有统计学意义。3、用NF-κB抑制剂Bay 11-7082抑制NF-κB后,姜黄素组炎症因子IL-6、IL-1β的mRNA表达水平明显上升,P<0.05,有统计学意义,TNF-αmRNA表达水平有一定升高趋势。三七总皂苷组的炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA表达水平有升高趋势。莪术醇组炎症因子IL-6、IL-1β的mRNA表达水平有一定降低趋势,TNF-α的mRNA表达水平有升高趋势。4、姜黄素组、莪术醇组Smad2/3蛋白磷酸化表达水平降低,P<0.05,有统计学意义。致纤维化因子α-SMA、Smad2/3、TGF-β的mRNA表达水平有降低趋势,三七总皂苷组Smad2/3蛋白磷酸化的表达水平及Smad2/3、TGF-β的mRNA表达水平升高,P<0.05,有统计学意义。三七总皂苷组α-SMA的mRNA表达水平降低,P<0.05,有统计学意义。5、用NF-κB抑制剂Bay 11-7082抑制NF-κB表达后,与模型组相比,姜黄素组α-SMA的mRNA表达水平升高,Smad2/3蛋白磷酸化的表达水平升高,P<0.05,有统计学意义。莪术醇组的α-SMA的mRNA表达水平则有升高趋势,Smad2/3蛋白磷酸化表达水平显著降低,P<0.05,有统计学意义。三七总皂苷组的α-SMA的mRNA表达水平有轻微下降趋势,Smad2/3蛋白磷酸化表达水平降低,P<0.05,有统计学意义。结论:1、莪术、三七的主成份莪术醇、姜黄素、三七总皂苷通过降低巨噬细胞内ROS的释放,减轻氧化应激反应的作用。同时,通过抑制NF-κB信号通路,下调炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β表达水平,缓解炎症反应。2、莪术的主成份莪术醇、姜黄素通过抑制TGF-β/Smads信号通路,可使致纤维化因子α-SMA、Smad2/3、TGF-β的mRNA表达水平降低。