研究背景:肿瘤的发病率和死亡率逐年上升成为危害人类健康的重大挑战之一[1]。卵巢癌死亡率居妇科恶性肿瘤首位[2]，近年来其发病率有上升趋势，严重威胁妇女生命健康。虽然在肿瘤细胞减灭术的基础上辅助化疗能有效地改善卵巢癌患者的生存时间，但晚期患者五年生存率仍徘徊在30%左右。因此，寻找新型卵巢癌治疗靶点，已成为现实的迫切需要。肿瘤细胞增殖是肿瘤发生发展的重要特征之一[3]。组蛋白甲基化是一种重要的可逆性的表观遗传修饰方式，参与调控染色质的结构和基因的表达，其甲基化状态由组蛋白甲基转移酶（histone methyltransferases，HMTs）和组蛋白去甲基化酶(histone demethylases，HDMs)共同调节，研究发现组蛋白甲基化与去甲基化失平衡与肿瘤发生发展密切相关[4]。赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1(Lysinespecific demethylase1，LSD1)是第一个被发现的组蛋白去甲基化酶[5]，调控多种基因的转录，在多种肿瘤组织中高表达，与肿瘤预后呈负相关[6]，抑制LSD1能抑制肿瘤细胞增殖[7]，表明LSD1在肿瘤的发生发展过程中起着促进肿瘤细胞增殖的作用。由于表观遗传修饰可以导致基因沉默但不伴有基因序列的改变，因此，研究人类疾病表观修饰机制对疾病的治疗具有重要意义。目前有多种组蛋白修饰酶已成为肿瘤治疗的重要靶点[8]，LSD1有望成为一种新的抗肿瘤作用的靶标。本实验通过研究LSD1对卵巢癌细胞增殖和细胞周期的影响及可能机制，为寻求卵巢癌治疗的新靶标提供理论基础。研究目的:利用RNA干扰技术沉默卵巢癌细胞中的LSD1基因，探讨其对卵巢癌细胞增殖和细胞周期的影响及可能机制。研究方法:1.LSD1在卵巢癌细胞株中的表达应用免疫印迹法(Western blot)在蛋白水平上检测4种人卵巢癌细胞株ES-2、HO-8910、SKOV-3和OVCAR-3细胞中LSD1的表达情况。2.细胞转染采用脂质体介导法将LSD1-siRNA转染卵巢癌细胞株，采用实时荧光定量PCR（FQ-PCR）和Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测转染前后LSD1的表达。3.沉默LSD1基因对卵巢癌细胞增殖和细胞周期的影响MTT检测细胞增殖能力，EdU试剂盒检测细胞DNA合成能力，流式细胞术分析细胞周期。4.沉默LSD1基因后细胞中H3K4me2水平的变化通过Western blot检测沉默LSD1基因后细胞中H3K4me2的水平。5. LSD1影响卵巢癌细胞增殖和细胞周期的机制研究采用FQ-PCR检测LSD1沉默后p21、CCNA2的mRNA的表达情况，初步探讨LSD1基因对卵巢癌细胞增殖和细胞周期调控的机制。6.统计学分析应用SPSS18.0软件进行统计学分析，数据结果以±s表示，行方差齐性检验和t检验，检验水准为α＝0.05。P<0.05为差异有统计学意义。结果:1. LSD1在多种卵巢癌细胞中均有表达，细胞株OVCAR-3的LSD1表达水平最高。2. LSD1-siRNA转染卵巢癌细胞后，FQ-PCR和Western blot检测显示，LSD1的表达明显受抑制，其mRNA和蛋白表达抑制率分别为78.98%和48.72%，差异有统计学意义（P<0.05）。3. LSD1-siRNA转染卵巢癌细胞后，细胞增殖速度减慢，DNA合成能力降低，S期细胞比例降低，G2/M期细胞比例增加，差异有统计学意义（P<0.05）。4. LSD1-siRNA转染卵巢癌细胞后，Western blot结果显示，细胞中H3K4me2的水平升高，是空白对照组的1.57倍，差异有统计学意义（P<0.05）。5. LSD1-siRNA转染卵巢癌细胞后，FQ-PCR结果显示，p21mRNA表达升高，是空白对照组的1.36倍；CCNA2mRNA表达水平较空白对照组下降了68.73%，差异有统计学意义（P<0.05）。结论:1. RNA干扰沉默LSD1基因的表达可抑制卵巢癌细胞的增殖能力，使细胞在G2/M期发生细胞周期期滞。2. LSD1沉默后可能通过调控细胞增殖、细胞周期相关的基因的转录抑制卵巢癌细胞的生长。