论文部分内容阅读
对霉酚酸(MPA)及霉酚酸酯(MMF)的HPLC检测、MPA的发酵及分离纯化工艺和MMF的合成进行了较系统的研究,并确定了MMF的化学结构。建立了MPA和MMF的定量分析方法—反相高效液相色谱法,确定了高效液相色谱法的条件,色谱柱为Diamonsil C8 150×4.6mm,5μm,检测器为249nm,测定MPA的流动相为乙腈:0.1%三氟乙酸水溶液=50:50,测定MMF的流动相为乙腈:0.1%三氟乙酸水溶液=45:55,流速为1.0mL/min,进样量为20μl;柱温为室温。该方法具有良好的线性关系,线性范围为0~1.183mg/ml(MPA)和0~0.862mg/ml(MMF),准确度和精密度均较高。采用自然选育的方法将实验室保藏的菌种进行复壮纯化处理,得到一株生产水平稳定的菌种P.brevicompactum L。该菌种的产抗能力较原始出发菌株提高了9%。对该株MPA产生菌的摇瓶发酵工艺进行了研究,优化了培养基组成和培养条件,考察了斜面培养基、种子培养基、碳源、氮源、Fe2+以及pH、温度、摇床转速等对MPA发酵的影响。调整后的培养条件是:培养基初始pH 4.0,28℃,振荡培养(220r/min)13天。采用均匀设计得到优化的发酵培养基配方是:葡萄糖240g/L,甘氨酸22g/L,KH2PO4 6 g/L;。在该优化条件下进行液体发酵,MPA的摇瓶发酵产量达到8.565g/L,比在原始条件下提高了89%。建立了从菌体里提取MPA的工艺过程。加入7%-10%的硅藻土搅拌30min,用2倍体积的乙醇浸泡过滤得到的菌体,将浸泡液浓缩至无乙醇,得到MPA固体,将其完全溶于2倍体积的乙酸乙酯,加入5%活性炭脱色,滤除活性炭,脱色液浓缩-4℃放置24h,析出大量浅棕色MPA针状晶体。在40℃把粗品完全溶于5倍体积的乙醇中,-4℃放置24h,过滤、干燥,得到了含量达到99%的MPA纯品,整个流程收率为45%。建立了合成MMF的直接酯化法的工艺过程。将过量吗啉乙醇加入到含有MPA的甲苯/二甲苯(1:1)混和溶剂中缓慢酯化。得到了药品级的MMF纯品,考察了样品和标准品的紫外(UV)光谱、红外(IR)光谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱和质谱。将谱图一一对照,各谱图都基本吻合,证明所制备的MMF产品与标准品为同一物质。