七鳃鳗作为无脊椎动物向脊椎动物进化的重要纽带,拥有最古老的适应性免疫防御机制,七鳃鳗免疫机制的研究对于揭示适应性免疫的起源与进化具有重要的价值。外泌体是直径为30~150 nm的囊泡样膜结构,在细胞间信息交流、免疫应答、肿瘤发生等过程中扮演了重要的角色。目前对外泌体的相关研究主要集中于高等脊椎动物,如人类和小鼠等,而关于外泌体在七鳃鳗中的研究仍为空白。由于外泌体在形态功能以及分泌过程中的高度保守性,我们以日本七鳃鳗(Lampetra japonica)为实验材料,通过对哺乳动物外泌体的纯化与鉴定方法的优化、改进,对七鳃鳗白细胞来源外泌体进行分离纯化,并对其形态进行了表征。由于目前七鳃鳗外泌体中相关标记蛋白依然未知,因此我们对外泌体标记分子Alix以及内质网标记分子GRP78在七鳃鳗中的同源基因分别进行克隆,并进一步通过Western Blot,检测白细胞来源外泌体中包括L-Alix在内的若干个标记分子,证明分离纯化产物为外泌体。通过对白细胞来源外泌体的蛋白质组分进行高通量分析,发现其中主要包含两类蛋白,外泌体标记蛋白例如CD81、Annexin A7、Integrin beta、Alix等;免疫调控蛋白例如TGF-β、CD45等。我们进一步克隆了TGF-β在七鳃鳗中的同源基因,并通过生物信息技术对该蛋白理化性质进行分析。携带细胞因子TGF-β的外泌体在七鳃鳗适应性免疫系统中的调控功能值得继续深入研究。总之,我们成功建立了七鳃鳗白细胞来源外泌体的纯化和鉴定方法,通过对其直径以及蛋白内含物进行表征,发现其形态和标记分子较为保守,并含有若干重要的免疫调控蛋白,这将为阐明外泌体在七鳃鳗免疫细胞间通讯中发挥的重要功能奠定研究基础,对于揭示七鳃鳗独特的适应性免疫系统的调控机制具有重要意义。