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目的:模拟体内造血微环境,植入体外扩增和未扩增的脐血干/祖细胞,探讨脐血干/祖细胞和扩增后祖细胞的植入能力,改善植入条件,提高移植效率,最终达到造血重建和免疫重建,为脐血干细胞移植成功应用于成年患者提供理论和实验依据。方法:应用体外细胞液体培养、混合集落培养(CFU-mix)及鉴定、细胞化学染色、流式细胞仪(FACS Calibur)分析检测等技术进行实验。①应用密度梯度离心法获得脐血的单个核细胞(mononuelear cell,MNC),选用细胞因子组合液体培养体系对其进行体外扩增,预铺设骨髓基质细胞滋养层(bone marrow stromal cell,BMSC),利用铺展贴壁实验研究其植入能力。 ②扩增前后脐血干/祖细胞植入能力研究的实验分组:A组为扩增后细胞植入组(祖细胞);B组为未扩增细胞植入组(干/祖细胞);C组为混合细胞植入组(1/3A组+2/3B组)。③改善植入条件研究的实验分组如下:A组为混合细胞组接种于脐血基质细胞滋养层;B组为混合细胞组接种于成人正常骨髓基质细胞滋养层;C组为混合细胞组接种于急性白血病完全缓解骨髓基质细胞滋养层;D组为混合细胞组接种于经碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)处理的急性白血病完全缓解骨髓基质细胞滋养层。 <WP=5>结果:①1.064g/L Ficoll-hypaque所分离的脐血单个核细胞中CD34+细胞含量为2.41±0.41%;所分离的细胞体外易形成CFU-mix;CD44+细胞平均含量为2.35±0.39%。 ②脐血MNC在干细胞生长因子(SCF)、白细胞介素-3(IL-3)、粒-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)存在的情况下,14天后CD34+细胞总数扩增近28.6倍,扩增后表达CD44的细胞数量超过扩增前水平。③未扩增的脐血细胞组有15.1±2.1%的MNC植入成人正常骨髓基质细胞层(hBMSC),扩增后脐血细胞有12.3±1.6%植入hBMSC,混合细胞组有25.2±3.8%植入hBMSC,较前两组有显著性差异(P<0.05)。④脐血混合细胞组接种于脐血基质细胞滋养层(A组)、正常成人骨髓基质层(B组)、急性白血病完全缓解骨髓基质层(C组)、及经bFGF处理的完全缓解白血病骨髓基质层(D组),其植入率分别为42.2±5.6%、25.2±3.8%、23.4±3.6%和34.8±3.3%,A组较后三组均有显著性差异(P<0.05), 植入细胞的CFU-mix集落形成率A组(67.4±8.3/2×105)显著高于后三组(P<0.05), D组植入细胞的CFU-mix集落形成率(51.4±6.7/2×105)亦高于B、C两组(P<0.05),其植入率34.8±2.3%比B、C两组高(P<0.05),B、C两组之间无显著性差异(P>0.05)。 结论:①不同密度梯度比重的淋巴细胞分离液分离脐血造血干/祖细胞具有不同效果,1.064g/L Ficoll-hypaque所分离的脐血造血细胞中CD34+含量高,体外有较强的增殖能力。②单份脐血进行部分冻存、部分扩增,进而混合植入,可解决脐血造血细胞数量不足和扩增后由于细胞分化所致的干细胞缺如问题。③经bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)处理的急性白血病完全缓解的骨髓基质微环境可以提高脐血造血细胞的植入率。