研究背景与目的地中海贫血是最常见的单基因遗传病之一,主要分为两类:α-地中海贫血和β-地中海贫血。通常来说,β-地中海贫血是常染色体隐性遗传病,在携带者中仅表现出血液学异常,而纯合子以及复合杂合子的患者表现的最为严重并依赖定期输血。少数情况下会出现罕见的显性β-地中海贫血,这一类患者的α-珠蛋白基因正常,在仅携带一个突变的β-珠蛋白基因的情况下,其在临床上表现为中度至重度的溶血性贫血。这引起了我们的对显性β-地中海贫血的思考和重视。在本研究中,我们收集到一例由HBB基因上的新发突变导致的显性重型β-地中海贫血表型的案例,并对其进行分子学研究分析。材料与方法1.材料:我们的先证者是一名来自中国浙江台州三岁的男童,其表现为不明原因的严重贫血和脾肿大。2.实验方法:采集先证者及其家系成员的血液完成血型学表型分析、异丙醇实验和包涵体试验。通过靶向捕获二代测序技术检测到新突变位点,再设计引物扩增该片段,Sanger测序验证突变位点。对先证者与其父母之间进行亲子鉴定。收集先证者的毛囊、口腔拭子样本及其父亲的精液,提取DNA扩增β-珠蛋白基因验证先证者及其父亲是否存在嵌合。对突变位点进行物种保守性分析以及进行蛋白二级结构和三维结构的预测。构建HBB基因野生型和HBB:c.399delA突变型的过表达载体转染293t细胞,同时进行荧光定量PCR分析被转染细胞的HBB表达量,另外再通过Western-Blot分析HBB的翻译有没有影响。研究结果经二代测序和Sanger测序验证发现先证者携带一个全新的点突变HBB:c.399delA。血红蛋白电泳并未检测到先证者有异常血红蛋白,异丙醇实验和包涵体阴性。父母和哥哥的分子诊断结果表明并未携带该新突变。亲子鉴定证实先证者遗传了分别来自父母的两套遗传物质。先证者毛囊和口腔拭子的HBB基因型与血液样本一致,先证者父亲的精液中未检测到该新突变。物种保守性分析提示序列高度保守,蛋白结构预测结果提示HBB:c.399delA的β-珠蛋白在羧基端延长了10个氨基酸。细胞实验证实HBB:c.399delA能影响β-珠蛋白基因翻译。结论本研究发现了一例在HBB基因3号外显子上的移码突变引起的重型β-地中海贫血。我们的研究表明了新突变报告的重要性并阐述了显性β-地中海贫血的潜在机制,扩展了β-地中海贫血的突变谱,进一步了解该疾病的异质性。