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目的:本实验拟通过MTT法、吖啶橙(AO)/溴乙啶(EB)荧光染色法、流式细胞术、Western印迹等方法,观察尼美舒利在体外对胶质瘤U87细胞增殖和凋亡的影响,并对其作用机制进行初步探讨。方法:取胶质瘤U87细胞培养18小时,根据尼美舒利作用的不同浓度分组:0.05、0.1、0.2、0.4、0.8mmol/L,不同的作用时间分组:12、24、48h;然后采用四甲基耦氮唑蓝(MTT)法计算胶质瘤U87细胞抑制率;吖啶橙(AO)/溴乙啶(EB)荧光染色法和AnnexinV-FITC/PI双染法流式细胞术检测U87细胞凋亡率的变化;最后使用Westem印迹法观察U87细胞中Cox-2、Bcl-2和Bax蛋白表达的变化。结果:(1)MTT法分析,发现用含不同浓度的尼美舒利溶液分别培养U87细胞12、24、48小时后,细胞生长被明显抑制,且与药物作用时间-浓度正相关。(2)吖啶橙(AO)/溴乙啶(EB)荧光染色和透射式荧光显微镜观察显示尼美舒利使胶质瘤U87细胞发生显著的凋亡形态改变;进一步应用AnnexinV-FITC/PI双染法流式细胞仪分析结果表明,尼美舒利主要使U87细胞发生在晚期凋亡,且随尼美舒利浓度的增加细胞凋亡率明显上升。(3)Western印迹凝胶电泳法发现用0.2、0.4、0.8mmol/L的尼美舒利溶液作用于U87细胞24小时后,尼美舒利不仅能剂量性地降低U87细胞中Bcl-2、Cox-2蛋白的表达,同时也可剂量依赖性地升高Bax蛋白的表达。结论:(1)尼美舒利在体外能有效地抑制胶质瘤U87细胞的生长,且细胞抑制率呈现时间-剂量依赖性;(2)尼美舒利能促进胶质瘤U87细胞凋亡,多发生在晚期,且细胞凋亡率呈剂量依赖性;(3)尼美舒利在体外能显著抑制胶质瘤U87细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能是通过抑制Cox-2蛋白和下调Bcl-2蛋白的表达,升高Bax蛋白的表达来实现其抗肿瘤作用。