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烯丙菊酯是第一个工业化的拟除虫菊酯产品,因其具有快速杀虫且安全无害等优点,逐渐成为在市场上不断推广的一类重要杀虫剂。4-羟基-3-甲基-2-2-(2-烯丙基)-环戊烯酮(简称HMPC)是合成烯丙菊酯的重要中间体。HMPC含一个手性中心,有两个对映体结构,其中S构型是活性成分。含(S)-HMPC的烯丙菊酯的杀虫活力是消旋烯丙菊酯的4倍多,因此研究生物法拆分消旋HMPC制备(S)-HMPC具有极大的应用前景。本文以烯丙醇酮乙酸酯为唯一碳源,经过富集培养从土壤中分离出200多株菌株,经过一系列初筛复筛,从中挑取活性较高且选择性最好的7#菌株为产酶菌株,该菌株所产水解酶能够优先水解(R)-烯丙醇酮乙酸酯。经过测定菌株16SrRNA基因序列及进行生理生化实验佐证,基本确定7#菌株为铜绿假单胞菌。对7#菌株进行两轮紫外和一轮DES诱变,得到产酶量大幅提高的突变株L8-3b19,发酵液酶活由初始的77.1U/1提高到248.3U/1,是原先的约3.2倍。对突变株的产酶条件进行了优化,得到最佳产酶培养基为:酵母膏10g/1,吐温-80 10g/1,(NH4)2SO4 2.0/1,K2HPO4 2.0/1,NaCl 1.1g/1,MgSO4 0.2/1,pH 7.0;最佳产酶培养条件为:种龄为18h,接种量为10%,培养温度为30℃,摇床转速200rpm,初始pH为7.0,250ml摇瓶装液30ml,最佳产酶时间为18h。通过以上优化工作,水解酶产量由最初的约240U/1提高到456U/1,提高了90%。通过转化条件优化,得到最佳反应条件为:温度50℃,pH为8.0,摇床转速为200rpm,较合适的反应浓度为105.4mmol/1,反应24h,转化率达到50.81%,ees为96.59%,E值由98提高到120左右。