目的:桂枝汤源于汉代医家张仲景所著《伤寒论》,使其开篇第一方,主要由桂枝、芍药、生姜、大枣和甘草五味饮片组成,具有发表解肌、调和营卫的功效。中药口服后的药效物质基础源于入血成分中,故本研究基于体内消化、吸收过程以及网络药理学方法探讨桂枝汤的药效物质基础。方法:1利用HPLC-MS/MS建立桂枝汤、大鼠给药桂枝汤后血清样品以及大鼠肠道内容物中桂枝汤主要成分含量的测定方法。2探讨大鼠口服及静注给药桂枝汤后主要成分在体内的药代动力学特征及口服绝对生物利用度(Fabs)。比较原型成分和代谢物在体内的消化、吸收、代谢过程的差异;3建立大鼠离体肠道非翻转模型,模拟胃肠道功能,探讨胃肠道不同部位对桂枝汤主要成分的吸收和转化作用;4大鼠皮下注射20%酵母后诱导其发热,灌胃给药桂枝汤后对其肛温进行测定,考察不同剂量桂枝汤的解热作用;5应用网络药理学方法,将桂枝汤分为原型成分和入血成分,分别预测成分靶点与疾病靶点(发热和胃肠道炎症),建立成分-靶点-疾病网络图,获取成分和疾病共同相关的靶点。利用IPA软件对成分与疾病共同相关靶点进行通路富集分析,筛选桂枝汤治疗以上两种疾病的核心成分与靶点,从而探讨桂枝汤的药效物质基础和异病同治的机制。结果:1利用HPLC-MS/MS建立了桂枝汤10个成分的含量分析方法以及大鼠给药桂枝汤后血清中14个成分(含5个代谢物)含量测定方法。同时利用HPLCMS/MS建立了大鼠胃肠道内容物中12个成分的测定方法。上述方法特异性高,灵敏度好。2药代动力学结果表明,桂枝汤经口服给药后各成分的AUC0-∞和Cmax随剂量增加而增加,显示出一级动力学特征。肉桂酸和6-姜酚脂溶性强,以原型的形式被直接吸收进入体内,具有较高的Fabs。而对于水溶性较强的苷类成分,如甘草苷、甘草酸等,其代谢物可被充分的吸收进入体内,具有较高的血药浓度和暴露量;大鼠静注给药桂枝汤后血中原型成分的血药浓度值明显高于代谢物的值;桂枝汤口服给药后大多数原型成分受到肠道菌群及酶的作用,使其在体内主要以代谢物的形式被吸收和利用。3离体肠道非翻转模型研究结果表明,桂枝汤主要成分在小肠上端(十二指肠)和结肠部位吸收率和透过率较好,提示其是桂枝汤成分的主要吸收部位。各成分在盲肠中的转化率较高,提示其是药物发生代谢的主要场所。4药效评价结果表明大鼠注射酵母后体温持续升高。随着给药剂量增加,大鼠升温变缓。高、中剂量组具有显著的解热作用,P<0.05。5网络药理学研究结果显示,桂枝汤中与发热疾病相关的成分有10个,分别来自5味饮片的入血成分(多为代谢物),而与胃肠炎症疾病相关的成分有17个,全部源于生姜中的原型成分。提示,桂枝汤中原型成分和体内代谢成分发挥的药效作用不同。通路结果表明,桂枝汤原型成分和入血成分是作用于相同通路上的不同疾病相关靶点而达到异病同治的效果。结论:中药口服后经肠道消化、吸收进入血液是药物发挥药效作用的关键步骤,所以中药“真正”的药效成分应该存在于被吸收进入血液的成分中,包括方剂原型成分和代谢产物。口服后桂枝汤成分受到肠道消化的影响,使其进入体内的物质形式发生改变,多以代谢物的形式被机体吸收和利用,提示该过程可能影响桂枝汤的药效作用。因此,研究药物原型及代谢物在体内的生物过程有助于寻找中药的药效物质基础。