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糖尿病肾病是糖尿病引起的一种严重且危害性较大的慢性并发症,由糖尿病引起的微血管病变而导致的肾小球硬化及蛋白尿是本病的特点。有报道称中国20岁以上成人的糖尿病患病率达9.7%,其中30%70%的患者可能发生糖尿病肾病（diabetic kidney disease,DN）。DN的发生与发展主要是由遗传易感性及高血脂、高血压和高血糖等环境因素的相互作用引起的。许多学者针对DN的诊治进行了大量的临床和基础研究,但尚有很多问题不能完全阐明,因此在DN的预防和治疗方面的进展十分有限。近些年研究发现,足细胞损伤和凋亡与蛋白尿有直接关系。细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白（Cytotoxicity T Lymphocyte Associated Antigen 4Immunoglobulin,CTLA-4-Ig）是一种免疫抑制剂,常用于免疫系统疾病,最新的基础研究表明,CTLA-4-Ig可将足细胞作为靶目标进行干预,从而减少足细胞损伤,以达到治疗DN的目的。本研究中,第一步,将大鼠分为正常对照组,CTLA-4-Ig干预糖尿病组和糖尿病造模组共三组,每组15只,检测CTLA-4-Ig对糖尿病大鼠血生化指标、肾血流动力学、肾实质弹性、肾组织病理及超微结构;第二步,将大鼠分为正常对照组,CTLA-4-Ig干预糖尿病肾病组和糖尿病肾病造模组共三组,每组15只,在第一步检测内容基础之上,检测肾实质组织中CD31、CD34、podocin、nephrin、B7-1的表达情况。第三步,将大鼠分为正常对照组,CTLA-4-Ig联合超声微泡干预糖尿病肾病组,CTLA-4-Ig干预糖尿病肾病组,超声微泡干预糖尿病肾病组和糖尿病肾病造模组共五组,每组15只,检测内容同第二步。第一部分CTLA-4-Ig对大鼠糖尿病肾病的预防作用目的:探讨CTLA-4-Ig对大鼠糖尿病肾病的预防作用。方法:以雄性SD大鼠为研究对象,高糖高脂喂养联合小剂量链脲佐菌素（STZ）构建2型糖尿病大鼠模型,糖尿病模型大鼠被随机分为CTLA-4-Ig组和糖尿病造模组,前者给予0.5mg·kg-1·w-1CTLA-4-Ig干预8-10周,直至糖尿病造模组全部发展成糖尿病肾病,另设空白对照组,每组15只。糖尿病造模组全部发展成糖尿病肾病后,检测血液生化指标,彩色多普勒超声检测肾动脉主干血流参数,超声弹性成像检测肾实质弹性,HE染色检测肾组织损伤,透射电镜检测足细胞超微结构改变。结果:糖尿病造模组和CTLA-4-Ig组的空腹血糖、内生肌酐清除率、24h尿白蛋白排泄率、肾小球肥大指数均高于对照组（P<0.05）;CTLA-4-Ig组的内生肌酐清除率、24h尿白蛋白排泄率、肾小球肥大指数均低于糖尿病造模组（P<0.05）。各组间的肾动脉主干血流收缩期峰值流速、舒张末期流速和平均流速差有显著差异,糖尿病造模组<CTLA-4-Ig组<空白对照组（P<0.05）;各组间的肾动脉主干血流收缩期加速度、搏动指数和阻力指数有显著差异,糖尿病造模组>CTLA-4-Ig组>空白对照组（P<0.05）。各组间的肾弹性评分有显著差异,糖尿病造模组>CTLA-4-Ig组>空白对照组（P<0.05）。肾组织HE染色和透射电镜观察足细胞超微结构显示糖尿病造模组和CTLA-4-Ig组都存在肾实质结构改变,糖尿病造模组较CTLA-4-Ig组严重。结论:CTLA-4-Ig能够明显抑制糖尿病大鼠的肾脏功能损害,抑制肾动脉主干血流阻力增加和流速降低,抑制肾实质硬度增加,抑制肾小球基底膜增厚,抑制足细胞减少。CTLA-4-Ig可明显延缓2型糖尿病大鼠的肾脏损害,对糖尿病肾病具有一定的预防作用。第二部分CTLA-4-Ig对大鼠糖尿病肾病的治疗作用和机制目的:探讨CTLA-4-Ig对大鼠糖尿病肾病的治疗作用及机制。方法:以雄性SD大鼠为研究对象,高糖高脂喂养联合小剂量链脲佐菌素（STZ）构建2型糖尿病肾病大鼠模型,糖尿病肾病模型大鼠被随机分为CTLA-4-Ig组和糖尿病肾病造模组,前者给予0.5mg·kg-1·w-1CTLA-4-Ig干预,另设空白对照组,每组15只。CTLA-4-Ig干预8周后,检测血液生化指标,彩色多普勒超声检测肾动脉主干血流参数,超声弹性成像检测肾实质弹性,HE染色检测肾组织损伤,透射电镜检测足细胞超微结构改变。检测肾实质组织中CD31、CD34、podocin、nephrin、B7-1的表达情况。结果:糖尿病肾病造模组和CTLA-4-Ig组的空腹血糖、内生肌酐清除率、24h尿白蛋白排泄率、肾小球肥大指数均高于对照组（P<0.05）;CTLA-4-Ig组的内生肌酐清除率、24h尿白蛋白排泄率、肾小球肥大指数均低于糖尿病肾病造模组（P<0.05）。各组间的肾动脉主干血流收缩期峰值流速、舒张末期流速和平均流速差有显著差异,糖尿病肾病造模组<CTLA-4-Ig组<空白对照组（P<0.05）;各组间的肾动脉主干血流收缩期加速度、搏动指数和阻力指数有显著差异,糖尿病肾病造模组>CTLA-4-Ig组>空白对照组（P<0.05）。各组间的肾弹性评分有显著差异,糖尿病肾病造模组>CTLA-4-Ig组>空白对照组（P<0.05）。肾组织HE染色和透射电镜观察足细胞超微结构显示糖尿病肾病造模组和CTLA-4-Ig组都存在肾实质结构改变,糖尿病肾病造模组较CTLA-4-Ig组严重。CTLA-4-Ig组和糖尿病肾病造模组大鼠肾脏实质的CD31和CD34的表达无明显差异（P>0.05）,但都高于正常对照组,糖尿病肾病造模组、CTLA-4-Ig组>空白对照组（P<0.05）。podocin和nephrin两种蛋白表达情况在三组间均存在显著差异,由高到低依次为,正常对照组>CTLA-4-Ig组>糖尿病肾病造模组（P<0.05）。B7-1蛋白表达情况在三组间均存在显著差异,由低到高依次为,正常对照组<CTLA-4-Ig组<糖尿病肾病造模组（P<0.05）。结论:CTLA-4-Ig能够有效改善糖尿病肾病大鼠的肾脏功能,降低肾动脉主干血流阻力,提高肾动脉主干血流流速,降低肾实质硬度,抑制足细胞减少。CTLA-4-Ig对糖尿病肾病大鼠肾脏组织CD31、CD34表达无明显影响,但可明显增加podocin、nephrin的表达,降低B7-1的表达。CTLA-4-Ig可明显改善2型糖尿病肾病大鼠的肾脏损害,对糖尿病肾病具有一定的治疗作用。第三部分CTLA-4-Ig结合超声微泡辐照对大鼠糖尿病肾病的治疗作用及其机制目的:探讨CTLA-4-Ig在超声微泡辐照下对大鼠糖尿病肾病的治疗作用及其机制。方法:以雄性SD大鼠为研究对象,高糖高脂喂养联合小剂量链脲佐菌素（STZ）构建2型糖尿病肾病大鼠模型,糖尿病肾病模型大鼠被随机分为CTLA-4-Ig联合超声微泡辐照组,CTLA-4-Ig组,超声微泡辐照组和糖尿病肾病造模组,CTLA-4-Ig联合超声微泡辐照组给予0.5mg·kg-1w-1CTLA-4-Ig+1ml·kg-1w-1超声微泡同步干预,同时超声辐照经静脉注射的超声微泡,CTLA-4-Ig组给予0.5mg·kg-1·w-1 CTLA-4-Ig干预,超声微泡组辐照给予1ml·kg-1·w-1超声微泡干预,同时超声辐照经静脉注射的超声微泡,另设空白对照组,每组15只。干预8周后,检测血液生化指标,彩色多普勒超声检测肾动脉主干血流参数,超声弹性成像检测肾实质弹性,HE染色检测肾组织损伤,透射电镜检测足细胞超微结构改变。检测肾实质组织中CD31、CD34、podocin、nephrin、B7-1的表达情况。结果:空腹血糖,CTLA-4-Ig联合超声微泡辐照组、CTLA-4-Ig组、超声微泡辐照组和糖尿病肾病造模组四组间无显著差异（P>0.05）,但四组均明显高于正常对照组（P<0.05）;内生肌酐清除率、24h尿白蛋白排泄率、肾小球肥大指数这三项指标,超声微泡辐照组和糖尿病肾病造模组两组间无显著差异（P>0.05）,且均高于对照组、CTLA-4-Ig联合超声微泡辐照组和CTLA-4-Ig组（P<0.05）,且后三组由高到低顺序依次为CTLA-4-Ig组>CTLA-4-Ig联合超声微泡辐照组>对照组。肾动脉主干血流收缩期峰值流速、舒张末期流速和平均流速这三项指标,超声微泡辐照组和糖尿病肾病造模组两组间无显著差异（P>0.05）,且均低于对照组、CTLA-4-Ig联合超声微泡辐照组和CTLA-4-Ig组（P<0.05）,且后三组由高到低顺序依次为对照组>CTLA-4-Ig联合超声微泡辐照组>CTLA-4-Ig组（P<0.05）;肾动脉主干血流收缩期加速度、搏动指数和阻力指数这三项指标,超声微泡辐照组和糖尿病肾病造模组两组间无显著差异（P>0.05）,且均高于于对照组、CTLA-4-Ig联合超声微泡辐照组和CTLA-4-Ig组（P<0.05）,且后三组由高到低顺序依次为CTLA-4-Ig组>CTLA-4-Ig联合超声微泡辐照组>对照组（P<0.05）。各组弹性评分由低到高依次为,对照组<CTLA-4-Ig联合超声微泡辐照组,CTLA-4-Ig干预组<超声微泡辐照组,糖尿病肾病造模组（P<0.05）。肾组织HE染色和透射电镜观察足细胞超微结构显示糖尿病肾病造模组和超声微泡辐照组改变较明显,CTLA-4-Ig组和CTLA-4-Ig联合超声微泡辐照组改变轻于糖尿病肾病造模组和超声微泡辐照组。糖尿病肾病造模组,超声微泡辐照组,CTLA-4-Ig组和CTLA-4-Ig联合超声微泡辐照组肾脏实质的CD31和CD34的表达无明显差异（P>0.05）,但都高于正常对照组（P<0.05）。Podocin和nephrin两种蛋白表达情况在五组间存在显著差异,由高到低依次为,正常对照组>CTLA-4-Ig联合超声微泡辐照组>CTLA-4-Ig组>超声微泡辐照组、糖尿病肾病造模组（P<0.05）,超声微泡辐照组和糖尿病肾病造模组无明显差异（P>0.05）。B7-1蛋白表达情况在五组间存在显著差异,由低到高依次为,正常对照组<CTLA-4-Ig联合超声微泡辐照组<CTLA-4-Ig组<超声微泡辐照组、糖尿病肾病造模组（P<0.05）,超声微泡辐照组和糖尿病肾病造模组无显著差异（P>0.05）。结论:单纯CTLA-4-Ig和CTLA-4-Ig+超声微泡辐照均可有效改善糖尿病肾病大鼠的肾脏功能,降低肾动脉主干血流阻力,提高肾动脉主干血流流速,降低肾实质硬度,抑制足细胞减少,可明显增加podocin、nephrin的表达,降低B7-1的表达。且CTLA-4-Ig+超声微泡辐照明显好于单纯CTLA-4-Ig。但两种方法对肾实质组织中CD31、CD34的表达均无明显影响。CTLA-4-Ig通过保护足细胞达到防治糖尿病肾病的目的,超声微泡辐照有助于CTLA-4-Ig穿过肾小球基底膜达到足细胞,CTLA-4-Ig联合超声微泡辐照在对糖尿病肾病治疗方面明显好于单纯应用CTLA-4-Ig。