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目的:观察虫草益肾颗粒对高糖培养下人肾小球系膜细胞(Human mesangial cells,HMCs)增殖和氧化应激的影响,探讨虫草益肾颗粒对人肾小球系膜细胞的作用机制。方法:依据血清药理学,制备虫草益肾颗粒和福辛普利的含药血清,然后进行药物血清干预HMCs的研究。体外培养HMCs,随机分为正常组、高糖组、福辛普利组及虫草益肾颗粒低、中、高剂量组6组。培养24 h、48 h、72 h后收集细胞和细胞上清液。采用CCK-8法检测24 h、48 h、72 h时HMCs增殖情况;采用流式细胞术检测48 h、72 h时细胞内活性氧簇(Reactive oxygen species,ROS)水平;采用比色法检测 48 h、72 h 时 HMCs上清液中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-PX)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)活性和丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量的变化;Real-time PCR 检测48 h、72 h时NADPH氧化酶亚型p22 phox和p47 phox的mRNA表达;Western Blot检测48 h、72 h时p22 phox和p47 phox的蛋白表达情况。结果:1.CCK-8法检测细胞增殖情况:与正常组比较,高糖(30 mmol/L)条件下,HMCs在24 h、48 h、72 h三个时间点均有细胞增殖的效应,差异有统计学意义(P<0.01)。48h和72h时,与高糖组比较,福辛普利组与虫草益肾颗粒低、中、高剂量组均出现了对HMCs增殖的抑制作用,且差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。2.各组HMCs ROS表达情况比较:流式细胞术检测结果显示,同时间,与正常组比较,高糖组的HMCs内ROS生成量明显增多(P<0.05);与高糖组比较,经药物干预后的福辛普利组、虫草低、中、高剂量组细胞内ROS生成量明显减少,且差异有统计学意义(P<0.01),提示各治疗组均有疗效。3.各组细胞上清液中的SOD、GSH-PX、CAT活力和MDA含量的变化:同时间比较,高糖刺激后SOD、GSH-PX、CAT活力显著下降,MDA含量明显升高(P<0.01或P<0.05),经福辛普利和虫草益肾颗粒含药血清干预后,同时间,与高糖组比较,SOD、GSH-PX、CAT活力不同程度升高,MDA含量下降(P<0.01或P<0.05)。4.各组人肾小球系膜细胞p22 phox和p47 phox mRNA表达情况比较:同时间,与正常组比较,高糖组p22 phox和p47 phox mRNA表达水平明显升高(P<0.01);同时间,与高糖组比较,各治疗组均可不同程度地下调 p22 phox 和 p47 phox mRNA 表达(P<0.01)。5.各组人肾小球系膜细胞p22 phox和p47 phox蛋白表达量的比较:正常组HMCs中可低水平地表达p22 phox和p47 phox蛋白,与同时间点的正常组比较,高糖组中的p22 phox和p47 phox蛋白表达量明显增多(P<0.01);同时间,与高糖组比较,各治疗组的p22 phox和p47 phox的蛋白表达量均下调(P<0.01)。结论:1.高糖刺激下,可促进HMCs的增殖,使活性氧簇ROS生成增多,降低SOD、GSH-PX、CAT活力、提高MDA含量,上调p22phox和p47phox mRNA及蛋白表达水平,从而加剧氧化应激反应。2.虫草益肾颗粒对高糖培养下HMCs的增殖有抑制作用。3.虫草益肾颗粒可能通过降低活性氧簇ROS的生成、提高酶抗氧化系统中SOD、GSH-PX、CAT活力、降低MDA的含量、下调p22phox和p47 phox mRNA及蛋白表达水平等途径来干预肾小球系膜细胞的氧化应激反应。4.抑制HMCs的增殖和氧化应激反应可能是虫草益肾颗粒防治DKD,保护肾脏,延缓疾病进展的作用机制之一,同时该中药复方的治疗作用具有一定时间和剂量效应依赖性。