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目的:建立一种简便、快速、精密的高效液相色谱(HPLC)测定血清胆固醇酯n-3脂肪酸指数(CE n-3指数)的方法,用于多不饱和脂肪酸(PUFA)摄入人群营养筛查,并研究CE n-3指数与心血管疾病危险因素的关系。方法:采集血液样品,凝血后离心分离血清,用氢氧化钠(NaOH)乙醇溶液水解血清甘油三酯(TG),乙酸终止水解反应,正己烷提取胆固醇和胆固醇酯(CE), HPLC分离脂质,紫外(205 nm)检测,计算n-3脂肪酸CE在所有CE中的百分比(CEn-3指数)。胆固醇二十碳五烯酸酯(20:5-CE)和二十二碳六烯酸酯(22:6-CE)用液相色谱串联质谱(LC/MS/MS)鉴定,各CE峰面积校正因子用测定相应组分胆固醇含量的方法确定,归一化法定量,各CE的百分含量用校正的CE摩尔百分比表示。征集106名健康北京居民,测量身高、体重、血压,用上述方法测定血清标本CE n-3指数,描述此范围的人群分布特征,用HPLC法测定FERHDL,用酶法测定血清总胆固醇(TC)和TG,用超速离心HPLC法测定HDL-C、HDL亚类胆固醇(HDL2-C和HDL3-C)、低密度脂蛋白(LDL)胆固醇(LDL-C)、LDL亚类胆固醇(LDLa-C和LDLb-C)和脂蛋白(a)胆固醇[Lp(a)-C],分析CE n-3指数与其他指标的关系。结果:1.HPLC测定CE n-3指数的色谱条件为:采用Nova-Pak C18色谱柱(5μm,3.9mmx 150 mm);流动相为乙腈-异丙醇-正己烷=55-50-15;紫外205nm检测;流速为1.2mL/min;进样50uL;色谱分析在6分钟内完成;且血清中n-3 CE与其他CE分离良好。2.影响CE n-3脂肪酸指数测定的TG用4mol/LNaOH的乙醇溶液水解30秒,可被去除,CE n-3指数预计比实际水平低约3%,对测定结果影响较小,出于实用考虑,可以作为去除TG的方法。3.比较两种提取溶剂对样品中各脂质的提取效率,结果显示一致,表明溶剂可以充分提取各脂质组分,在一定程度上可以保证测定结果的准确性。4.测定血清CE n-3指数的批内和总变异系数分别为0.36%-0.86%和0.65%~1.17%,远优于红细胞膜n-3指数的分析重现性(CV=4-7%)。5.测定106例北京居民血清CE n-3指数,全体指数略呈正偏态分布(偏度值=1.25,峰度值=1.70),中位数为0.98%(0.37%~2.40%)。n-3指数对数基本呈正态分布(偏度值=0.24,峰度值=0.27),均值为0.0037%,标准差为0.15%,95%分布区间为(-0.0248%,0.0322%)。性别组n-3指数分布与全体类似,女性和男性中位数分别为1.08%(0.60%~2.40%)和0.95%(0.37%-2.11%),女性明显高于男性(t=2.694,P=0.008)。相关分析结果显示,CE n-3指数与收缩压、TG和FERHDL显著正相关(P<0.05或0.01);CE n-6/n-3与身高、TC、TG、LDL-C、LDLa-C、FERHDL和CE n-3指数显著负相关(P<0.05或0.01);PUFA/MUFA与HDLC、HDL2-C、HDL3-C、LDL-C和LDLa-C显著正相关(P<0.05或0.01);与年龄、体重、BMI、收缩压、TG和CE n-6/n-3显著负相关(P<0.05或0.01)。结论:1.建立了HPLC测定血清CE n-3指数的方法,该法简便、快速、精密、成本低,有望在营养监测和心血管病危险分析中发挥作用。2.测定了106名北京居民CE n-3指数,给出了此人群CE n-3指数的参考值及分布特征,并分析了该指标与一般体征指标及常规血脂指标的关系。