壳聚糖诱导烟草抗病机理研究

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1.以9种植物病原真菌为试验材料,利用PDA为培养基,研究了离体条件下不同浓度的壳聚糖处理对植物病原真菌的抑制活性和抑菌作用的持效时间。结果表明,壳聚糖对9种植物病原真菌的菌落形态、菌丝生长和繁殖等均有一定的影响。当壳聚糖浓度≥2.0g/L时,除葡萄炭疽病菌(Colletotrichum gloeospotioides)外,其他8种植物病原真菌的生长都受到了显著抑制(p<0.05);在0.75g/L~5.0g/L的浓度范围内,浓度越高抑菌效果越明显,但抑菌强弱与浓度不成正比;而浓度≤0.75g/L时对葡萄炭疽病菌的生长具有促进作用。高浓度壳聚糖抑菌持效期长,抑菌率下降慢。9种真菌的最低抑菌浓度(minimuminhibitory concentration,MIC)从3.0g/L到≥5.0g/L。壳聚糖对植物病原真菌抑制活性受浓度、时间和病原真菌种类等因素影响。2.烟草黑胫病菌(Phytophthora parasitica var nicotianae,Ppn)是严重危害烟草生产的一种致病真菌,试验中以Ppn为材料,探讨了4种不同分子量的壳聚糖在不同浓度和pH时对Ppn的菌落、菌丝的形态结构和菌丝生长的影响,以及对孢子萌发的抑制作用。在壳聚糖处理后Ppn菌丝出现畸变,正常的新陈代谢和细胞壁结构受到明显影响和破坏。在低浓度下(≤0.625mg/L),壳聚糖抑菌效果随分子量增大而增强;分子量越小受浓度影响越大,浓度≥5.0mg/L时,分子量为4.7×10~4的壳聚糖抑菌效果最强。除分子量为5.0×10~3的壳聚糖外,其它分子量较大的壳聚糖受pH影响明显。壳聚糖分子量不同,其抑菌主要机理可能也不同,浓度、pH和分子量是壳聚糖抑菌活性的重要影响因素。3.配制四种壳聚糖溶液,直接喷洒到对烟草黑胫病易感和具有抗性的两种烟草的叶片上,观测其对烟草叶片中POD、PAL两种抗病相关酶的活性的诱导,同时作了POD的同工酶分析。壳聚糖诱导后两种烟草的POD、PAL在96h内均出现酶活性高峰。出现时间和强弱在两种烟草中不同,抗病性的中烟100活性较高。同工酶电泳也发现4条同工酶带染色均加深,但并没又发现新的酶带和不同品种的特征性酶带。同时,病菌Ppn感染也激发了烟草叶片中两种酶活性的升高,但都只有一个酶活性峰。壳聚糖能够诱导烟草抗病能力的升高,诱导强度与浓度、分子量有关,整体上CS1诱导效应产生更快一些。4.采用SDS电泳和红外光谱分析了壳聚糖对Ppn和两种烟草可溶性蛋白和化合物合成的影响。总体上,壳聚糖抑制Ppn中蛋白的合成,而对烟草的蛋白具有激发活性,但没有发现蛋白带的缺失或增加。红外光谱分析发现光谱吸收峰与壳聚糖分子量有关,接菌处理也能促使部分峰的升高,但与壳聚糖处理有差别。没有蛋白带和光谱吸收峰的出现或消失,主要是量的增加或减少,说明壳聚糖诱导烟草抗病和抑制Ppn生长是系统性的复杂反应。5.直接将壳聚糖喷洒到烟草上,测定相对电导率和烟草病情指数变化。壳聚糖能够降低烟草叶片的相对电导率,增强烟草的抗逆能力。能够诱导烟草抗病能力的提高,对红花大金元和中烟100诱导防效分别在72h、48h最高达到29.9%和44.1%。壳聚糖诱抗效果与壳聚糖处理时间长短和壳聚糖浓度、分子量等有关。壳聚糖能明显诱导烟草抗病能力的升高。
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