毛百合与松叶百合组培技术研究

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本研究以百合属植物中的毛百合(Lilium dauricum)与松叶百合(Lilium cernum)为研究对象,分别以其植株的鳞片、鳞茎盘、无菌苗再生叶片、种子为外植体,建立了这两种百合的离体培养快繁体系,探讨了不同灭菌方式和时间、不同激素配比、不同成分的培养基、不同器官的外植体、不同含量的蔗糖与活性炭等很多因素对再生体系建立的影响。总结并得出了适宜毛百合与松叶百合组培快繁的正确方法,为保护与利用这两种百合的野生资源奠定了基础。(1)灭菌方式和时间两种百合的最佳灭菌方式相同,均为75%酒精浸洗配合0.1%升汞溶液灭菌,但灭菌时间不同。毛百合75%酒精浸30s+0.1%升汞8min,启动率达87.12%;松叶百合75%酒精浸30s+0.1%升汞5min,启动率可达89.76%。(2)外植体的初代培养两种百合的最佳外植体均为鳞片,最佳接种部位为鳞茎中层鳞片的基部,最佳采集时间为9月份。经过7d的4℃低温处理后的鳞片诱导率明显提高,毛百合提高了13.34%,松叶百合提高了23.33%。毛百合最佳诱导培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L,松叶百合最佳诱导培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.3mg/L。适宜作两种百合种子萌发的培养基为MS+NAA0.1mg/L。(3)愈伤组织的诱导以毛百合与松叶百合的叶片为外植体进行愈伤组织诱导时,最佳接种部位为叶片基部。最适培养基毛百合为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L;松叶百合为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.3mg/L。光照对两种百合叶片的分化有着抑制作用,暗培养可提高分化率。(4)增殖培养两种百合的增殖培养以MS为基本培养基,毛百合最佳增殖培养的激素组合为6-BA0.5mg/L+NAA0.3mg/L,松叶百合为6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L。蔗糖含量为30g/L时,毛百合与松叶百合的不定芽数量多,状态最好。综合增殖率、增殖芽数、不定芽长势三方面因素考虑,松叶百合和毛百合的继代时间均为30d效果最佳。(5)壮苗生根培养两种百合最适生根的基本培养基均为1/2MS培养基,但激素配比不同。毛百合只添加IBA0.5mg/L;松叶百合需添加NAA0.5mg/L+IBA0.5mg/L,在此条件下两种百合的生根率最高。生根培养基中毛百合不加入活性炭幼苗即可生根,松叶百合需添加0.5g/L活性炭方可促进生根。两种百合最适生根培养基中所添加蔗糖含量为20g/L时为最优。(6)炼苗移栽培养炼苗2d后移栽成活率最高,最适宜的栽培基质为草炭:园土:河沙=1:2:1。毛百合移栽成活率为80.75%,松叶百合移栽成活率为78.31%。
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