毛果杨PtrNAC1基因的克隆及在低氮环境下的响应

来源 :东北林业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:hensontan
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在杨树中,通过对转录组数据的分析,反映出某些基因对杨树侧根的生长起到了促进作用,通过建立一个遗传网络包含了大比例的差异调节转录,其中只有三个基因的转录对根系发育有强烈的影响,在低氮条件下,上下调节这三个基因分别引起根的增加和减少,转录因子PtrNAC1就是其中之一。  本实验先对PtrNAC1基因进行了生物信息学分析,预测毛果杨NAC蛋白在氨基酸序列12-137位有一个结构域,并且该结构域保守。从毛果杨根部的全基因组中克隆了PtrNAC1基因,并构建了植物表达载体pROKⅡ-PtrNAC1,分别进行烟草和84K杨的遗传转化并分别获得了抗性植株,以此为材料,进行低氮处理,分别设置了0、5mM NH4Cl、10mM NH4Cl、5mM NaNO3、10mM NaNO3处理液,对处理后的非转基因株系与转基因株系分别进行叶绿素含量、氮含量及生理生化指标的测定,得出结论:(1)PtrNAC1基因全长918bp,蛋白氨基酸残基数为305,相对分子质量34655.33,等电点PI为6.71,呈酸性,为不稳定蛋白,疏水性蛋白,通过分析预测其存在一个保守结构域NAC。(2)构建pROKⅡ-PtrNAC1植物表达载体,利用农杆菌介导法进行烟草遗传转化并获得抗性植株,选取基因表达量高、中、低三个转基因株系对其进行低氮处理,并对其叶片进行生理生化指标(POD、SOD、MDA)的测定。结果表明:在低氮处理下,转基因烟草优于非转基因烟草,其中高表达量的L1差异显著。(3)利用农杆菌介导法进行84K杨遗传转化并获得抗性植株,选取基因表达量高、中、低三个转基因株系进行低氮处理,并对其叶片进行叶绿素含量测定,对其叶片与根进行硝态氮、铵态氮与生理生化指标的测定。结果表明:在低氮处理下,转基因84K杨的叶绿素含量、硝态氮、铵态氮含量均高于非转基因84K杨,生理生化测定结果显示转基因84K杨优于非转基因84K杨,其中高表达量的L1差异显著。
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