【摘 要】
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背景:肝癌是最常见的消化系统恶性肿瘤之一,因其早期诊断率低及晚期预后差等特性,导致肝癌相关死亡率居高不下。原发性肝癌在形态学上主要分为肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）和肝内胆管细胞癌（intrahepatic cholangiocarcinoma,ICCA）,而HCC占原发性肝癌的70%～85%。HCC的治疗目前还是难题,尽管近年来在诊断和治疗方面取得了巨大的突
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背景:肝癌是最常见的消化系统恶性肿瘤之一,因其早期诊断率低及晚期预后差等特性,导致肝癌相关死亡率居高不下。原发性肝癌在形态学上主要分为肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）和肝内胆管细胞癌（intrahepatic cholangiocarcinoma,ICCA）,而HCC占原发性肝癌的70%～85%。HCC的治疗目前还是难题,尽管近年来在诊断和治疗方面取得了巨大的突破。在早期阶段的HCC治疗手段主要包括外科切除、局部消融、化疗以及肝脏移植等。但是仍然有70%的病人会有复发或转移的风险,这也是肝细胞癌患者5年生存率低、预后不佳的主要原因。因此,探索HCC的发生发展的分子机制显得十分重要。这有望能为临床肝癌患者治疗提供一个新视角。方法:（1）通过R语言的limma包和edgR包等分析TCGA数据库肝癌中长链非编码RNA表达情况,并可视化展示。（2）利用Trizol法提取肝细胞HL-7702及肝癌细胞HEP3B、LM3、SMMC-7721、HUH7的总RNA,去除基因组DNA后并逆转录为c DNA,然后实时荧光定量PCR检测RNA的表达情况。（3）CCK-8实验和平板克隆形成实验均用于检测肝癌细胞SMMC-7721、LM3的增殖情况。（4）划痕实验和Transwell实验用于检测肝癌细胞SMMC-7721、LM3的迁移和侵袭能力。（5）流式细胞实验检测肝癌细胞SMMC-7721、LM3的凋亡情况。（6）Western Blot检测肝癌细胞SMMC-7721、LM3的Cyclin D1、CDK4蛋白表达水平,以及检测HL-7702、SMMC-7721、LM3细胞中的KIF23蛋白表达情况。（7）数据库lnc RNASNP2、ENCORI用于预测LINC01419下游靶基因;Target Scan数据库用于预测miR-195-5p的下游靶基因。（8）荧光素酶报告基因实验检测SMMC-7721和LM3细胞中miR-195-5p和LINC01419、KIF23的关系。（9）构建过表达KIF23质粒并转染至SMMC-7721、LM3细胞中,反向验证通路LINC01419/miR-195-5p/KIF23是否成立。结果:（1）TCGA数据库通过分析374例肝癌组织和50例癌旁肝组织,结果显示许多长链非编码RNA均失调,但是LINC01419显著上调（p<0.0001）。肝癌细胞HEP3B、LM3、SMMC-7721、HUH7中LINC01419与正常肝细胞HL-7702相比明显高表达（p<0.05）。（2）敲低LINC01419表达后,肝癌细胞SMMC-7721、LM3增殖、迁移和侵袭能力明显是被抑制的（p均<0.05）,但是其凋亡情况无明显差异。（3）使LINC01419过表达后,促进肝癌细胞SMMC-7721、LM3增殖、迁移和侵袭（p均<0.05）,但凋亡情况仍无明显变化。（4）双荧光素酶报告基因实验显示:在肝癌细胞SMMC-7721、LM3中,长链非编码RNA LINC01419与miR-195-5p结合,而miR-195-5p与下游KIF23相结合。（5）敲低LINC01419明显抑制肝癌细胞SMMC-7721、LM3增殖、迁移及侵袭能力,但使KIF23过表达后,其被抑制的作用明显被抵消（p均<0.05）。结论:（1）LINC01419在肝癌细胞中过表达。（2）LINC01419在肝癌细胞中主要增强肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,而不影响其凋亡过程。（3）分子机制方面,LINC01419主要是通过miR-195-5p/KIF23通路调控肝癌细胞的生物学行为。
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