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目的:基于PI-3k/Akt信号通路,探究人参皂苷Rg1(GinsenosideRg1)对人胚肺成纤维细胞MRC-5的干预作用,从细胞层面、信号通路层面研究其对纤维化的作用机制,从而促进间质性肺疾病(ILD)的治疗进展,降低病死率,帮助减轻病患痛苦及经济负担。方法:依据课题设计思路及方案,研究对象为人胚肺成纤维细胞MRC-5,试验药物为人参皂苷Rg1,过氧化氢诱导MRC-5细胞氧化损伤模型建立,实验共分6组进行。1.构建人胚肺成纤维细胞MRC-5细胞的氧化应激模型及选择人参皂苷Rg1的最佳作用浓度。在构建氧化应激模型时,选用目前常用实验试剂过氧化氢(H2O2)作用于试验细胞人胚肺成纤维细胞MRC-5,诱导其出现氧化应激。依据作用于细胞的H2O2浓度不同而进行分组,并在药物作用24h后观察各组的氧化、抗氧化指标的变化情况。通过上述方法测得不同H2O2作用于细胞后的各项指标量,结合查阅相关试验资料,选出H2O2的最佳作用浓度,用于试验中氧化应激模型的建立。人参皂苷Rg1对人胚肺成纤维细胞MRC-5最佳作用浓度的选择,通过查阅资料,设定IC10为最大无毒浓度。使用6个不同浓度的人参皂苷Rg1干预试验细胞,在24h检测实验细胞的抑制率,最终选择最佳的人参皂苷Rg1作用浓度。2.观察人参皂苷Rg1对H2O2诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5氧化损伤的保护作用及PI-3k/AKT通路的作用。体外培养人胚肺成纤维细胞MRC-5,细胞复苏并传代后,将其分为6组,予以H202、人参皂苷Rg1、AKT抑制剂干扰,或者先后予以多种试剂干扰。具体实验分组如下(共6组):模型组(空白对照组)、过氧化氢处理组、人参皂苷Rg1干预组、人参皂苷Rg1干预1h后给予过氧化氢处理组、过氧化氢处理1h后给予人参皂苷Rg1治疗组、AKT抑制剂干预1h后给予人参皂苷Rg1再给予过氧化氢处理组。选取6、12、24h三个时间点,监测细胞各项指标的变化情况。使用CCK-8法检测细胞增殖,检测6组人胚肺成纤维细胞MRC-5在6、12、24h三个时间点时SOD、CAT、MDA、GSH的表达并进行组间、组内比较。Western blotting检测6组人胚肺成纤维细胞MRC-5在akt、p-akt、PI-3k蛋白表达并比较。RT-PCR检测6组MRC-5细胞在6、12、24h三个时间点时akt、PI-3k的表达。选取最佳时间点免疫荧光化学法观察胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ的变化情况。成果:人参皂苷Rg1在达到一定浓度后可以抑制MRC-5细胞增殖,减少细胞外胶原分泌,提高细胞SOD、GSH、CAT等抗氧化物水平,降低MRC-5细胞MDA水平,调节PI-3k/Akt信号通路akt、p-akt、PI-3k的蛋白表达;使用AKT通路抑制剂后,该作用效果改变。结论:人参皂苷Rg1对MRC-5细胞增殖具有明显抑制作用,在减少胶原分泌、提高细胞抗氧化损伤水平方面作用显著,能够起到抗肺纤维化作用,该作用与PI-3k/Akt信号通路相关。